水稻茉莉酸氨基酸合酶基因的鉴定及其在花发育和病害防卫反应中的作用

来源 :中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiuyuchengdisk
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茉莉酸信号在植物发育和防卫反应中起着重要作用。我们从两个独立的水稻Tos17插入突变群体NC2728和ND5001中发现了相同表型的小花突变体。我们将这两个突变体分别命名为openglume1-1(ogm1-1)和openglume1-2(ogm1-2),并将这种小花开放缺陷表型命名为openglume。初步检测表明,ogm1-1和ogm1-2突变体均属甲基茉莉酸(Methyl jasmonate,MeJA)响应缺陷突变体。   本文对NC2728和ND5001突变群体及其后代进行了遗传学分析,结果表明ogm1-1和ogm1-2突变体均属隐性遗传突变体。比较两个突变群体中Tos17插入侧翼序列标签后发现,两个突变群体中均有一个标签定位到水稻TIGR数据库注释的LOC Os05g50890基因内,暗示openglume突变表型可能是由于此基因的Tos17插入突变造成的。进一步对这两个突变群体的Southern杂交分析结果显示,仅仅LOC_Os05g50890基因内的Tos17插入纯合体才具有openglume突变表型,从而证实openglume突变表型与插入LOC_Os05g50890基因的Tos17紧密连锁。我们将LOC Os05g50890基因命名为OPENGLUME1(OGM1)。OGM1基因编码一个植物GH3家族蛋白。进化树分析结果显示,OGM1蛋白与拟南芥AtJAR1蛋白,烟草NcJAR4蛋白同源性最高(59.7%和65.0%)。Northern杂交结果显示,Tos17在OGM1基因的插入引发了OGM1基因的非正常转录,产生了异常转录本。   我们从野生型水稻中克隆了OGM1基因,并用于转化ogm1-1突变体,对转基因水稻的分析结果表明,OGM1基因的表达使突变体恢复了野生型表型,表现出正常的小花开放表型和对外源MeJA的敏感性。与野生型水稻相比,openglume突变体对稻瘟病病菌侵染的敏感性明显增高,而在野生型背景下过量表达OGM1的转基因株系对稻瘟病病菌的抗性明显增强,暗示OGM1基因可能是一个稻瘟病抗性的正调控因子。   OGM1启动子驱动的GUS转基因水稻分析结果表明,OGM1基因在根、茎、叶和花中都有表达,这和野生型水稻的Northern杂交结果一致。更详细的GUS活性检测表明,在根、茎、叶和叶鞘中,OGM1基因在韧皮部中表达最强;在小花中,OGM1基因的表达随小花的发育而呈现动态的变化,这可能与小花发育、小花开放和花药开裂有关。另外,外源MeJA、机械损伤和稻瘟病病菌侵染能够诱导水稻OGM1基因表达的变化。   高效液相色谱一质谱/质谱法定量分析揭示,openglume突变体叶片中JA-Ile等JA-AA轭合物(Jasmonic acid(JA)-amino acid conjugates)含量比野生型显著降低(从62-92%不等)。我们构建了GST-OGM1融合基因细菌表达载体,表达并获得了GST-OGM1融合蛋白;随后以茉莉酸和氨基酸为底物,进行GST-OGM1融合蛋白体外酶促反应。对反应产物的检测结果表明,OGM1蛋白具有茉莉酸氨基酸合酶(JA-amido synthetase)活性,能够催化六种氨基酸(Ile、Val、Leu、Met、Trp与Phe)和茉莉酸结合形成相应的JA-AA轭合物。   综上所述,本文确证了ogm1-1和ogm1-2突变体的突变表型系由OGM1基因的插入突变所致,OGM1基因编码一个茉莉酸氨基酸合酶,其是茉莉酸信号转导途径中的一个关键成员,并在小花发育和植物防卫反应中起重要作用。
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