【摘 要】
：
目的:明确A549干细胞（A549 stem cells,A549-SC）的放射抵抗性,并探索自噬在A549-SC放射抵抗中的作用及机制。方法:1.通过无血清悬浮培养法富集A549-SC,采用流式细胞术检测CD133+、CD44+标记细胞比例,WB检测干性相关基因及自噬相关基因的表达情况,克隆形成实验及CCK8实验检测经0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy X线照射后A549-SC及A549的细
【基金项目】
：
国家自然科学基金（82060544）；
论文部分内容阅读
目的:明确A549干细胞（A549 stem cells,A549-SC）的放射抵抗性,并探索自噬在A549-SC放射抵抗中的作用及机制。方法:1.通过无血清悬浮培养法富集A549-SC,采用流式细胞术检测CD133+、CD44+标记细胞比例,WB检测干性相关基因及自噬相关基因的表达情况,克隆形成实验及CCK8实验检测经0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy X线照射后A549-SC及A549的细胞存活分数（survival fraction,SF）及细胞活力以评估其放射抵抗性差异。2.通过慢病毒转染构建A549-SC-sh Beclin-1、A549-SC-NC、A549-NC、A549-oe Beclin-1细胞株。采用CCK8、克隆形成实验检测经4Gy X线照射后以上四种细胞的SF及细胞活力以检测调控Beclin-1对A549-SC及A549放射抵抗性的影响。3.采用WB检测A549-SC、A549经4Gy X线照射后γ-H2AX蛋白、RAD51蛋白、KU80蛋白、BAX蛋白、Bcl-2蛋白的表达差异,并检测A549-SC-sh Beclin-1、A549-SC-NC、A549-NC、A549-oe Beclin-1经4Gy X线照射后γ-H2AX蛋白、RAD51蛋白、KU80蛋白、BAX蛋白、Bcl-2蛋白的表达。结果:1.流式细胞术结果显示:A549-SC中CD133+和CD44+标记细胞率（33.16±2.46%）较A549（0.65±0.17%）明显增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。WB结果显示:A549-SC中LC3B、Beclin-1及Bmi-1、Nanog的蛋白表达较A549增高;p62的蛋白表达较A549下降,差异具有统计学意义（P＜0.05）。克隆形成实验结果显示:经0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy X线照射后,A549-SC的SF（100%,74.61±5.94%,61.23±2.69%,35.49±1.68%,11.58±17.4%）较A549（100%,49.08±07.01%,16.06±4.2%,7.91±1.2%,4.44±1.3%）明显增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。CCK8结果显示:经0Gy,2Gy,4Gy,6Gy,8Gy X线照射后,A549-SC的细胞活力（100%,90.28±1.2%,83.23±2.1%,71.36±7.2%,52.77±2.77%）较A549（100%,76.91±2.36%,62.39±9.16%,54.99±5.55%,30.72±7.09%）明显增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.克隆形成实验结果显示:经4Gy X线照射后,A549-SC-sh Beclin-1的克隆形成数（36.67±11.72）较A549-SC-NC（85.33±10.02）减少,A549-oe Beclin-1的克隆形成数（74.67±7.23个）较A549-NC（34±8.72个）增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）。CCK8结果显示:经4Gy X线照射后,A549-SC-sh Beclin-1的细胞活力（36.67±11.72%）较A549-SC-NC（78.9±3.93%）降低,A549-oe Beclin-1的细胞活力（80.34±3.47%）较A549-NC（43.33±8.93%）增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。3.WB结果显示:经4Gy X线照射后,A549-SC中γ-H2AX、BAX蛋白表达量较A549降低,而RAD51及Bcl-2较A549增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,各组中DNA损伤修复蛋白（KU80）的表达无明显差异。A549-oe Beclin-1中γ-H2AX、BAX蛋白表达量较A549-NC降低,而RAD51及Bcl-2较A549-NC增高,A549-SC-sh Beclin-1中γ-H2AX、BAX蛋白表达量较A549-SC-NC增高,而RAD51及Bcl-2较A549-SC-NC降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。A549-NC、A549-oe Beclin-1、A549-SC-sh Beclin-1、A549-SC-NC经4Gy X线照射后,KU80的表达无明显差异。结论:1.无血清悬浮培养获得A549-SC具有放射抵抗性,其高表达干性及自噬相关基因。2.自噬关键基因Beclin-1通过促进DNA损伤修复及抑制凋亡诱导了A549-SC的放射抗性。
其他文献
“微时代”是一个全新的命题，它是包含多种媒介、多种形式的新媒体时代下的新兴名称。文章结合微时代的时代背景，以全新的视角洞察档案文化宣传方式，探讨微时代档案文化宣传新举措。档案作为国家机关、社会组织和个人在社会实践活动中直接形成的各种形式的原始记录，本身具有非常丰富的信息内容，这些内容不仅为档案机构采用不同形式进行宣传品设计提供了空间，还为宣传品本身文化内核的构建提供了丰富的信息资源。档案管理机构需
目的:通过Pentacam研究瞳孔直径从明视状态进入暗视状态的变化规律以及眨眼对暗适应瞳孔直径的影响,最终为临床评估暗室瞳孔变化提供一定的参考依据。方法:观察性研究。纳入受试者97例（189眼）,其中正视组71眼与近视组118眼,使用Pentacam 70700仪器联合Dino-Lite数字显微系统采集不眨眼及眨眼的瞳孔直径的变化,记录:（1）明视状态进入暗视状态不同时间点瞳孔直径;（2）眨眼前后
目的:观察新鲜羊膜移植联合低频电刺激治疗对中重度宫腔粘连患者术后的月经情况、宫腔恢复情况、子宫内膜厚度、宫腔粘连评分、临床疗效以及妊娠率的影响。方法:选择2019年7月至2021年8月期间就诊我院妇科门诊,并经宫腔镜检查诊断为中、重度宫腔粘连的患者,按照纳入及排除标准筛选符合条件的研究对象,共收集有效病例77例,根据患者意愿分为对照组（42例）、研究组（35例）,对照组、研究组均在宫腔粘连分离术后
目的:研究LncRNA RP11-502I4.3在高糖环境下对人视网膜微血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelial cells,HRMECs）增殖、迁移和血管生成的影响。为探讨LncRNA RP11-502I4.3在DR发生发展中的分子机制提供实验基础。方法:1.通过qRT-PCR检测正常（5.5 mmol/L）及高糖（30.0 mmol/L）环境
第一部分:硅油、C3F8、空气充填对孔源性视网膜脱离预后的影响目的:对孔源性视网膜脱离（RRD）行玻璃体切除患者中,分别就填充硅油、惰性气体（C3F8）及空气的病人术后视网膜复位率、黄斑中心凹厚度、中心凹脉络膜厚度等指标进行比较,就填充物的选择为临床工作提供参考。方法:收集在我科2020年11月01日至2021年5月31日散瞳眼底检查诊断为孔源性视网膜脱离并于我院行玻璃体切除的77例患者。2例填充
目的:探索和构建孕鼠宫腔粘连（intrauterine adhesion,IUA）动物模型,为研究宫腔粘连的治疗提供更理想的动物模型。探讨人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs）移植对孕鼠宫腔粘连子宫内膜的修复效果。方法:1.酶消法从人羊膜中分离提取出人羊膜间充质干细胞,通过细胞免疫荧光和流式细胞术鉴定其表型特征,CCK-8法
目的:分析变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）患者鼻腔分泌物中骨膜蛋白（periostin,POSTN）与嗜酸性粒细胞（eosnophils,EOS）及IL-4、IL-13之间的关系及意义,探讨AR患者鼻腔分泌物中POSTN及EOS与患者症状严重程度是否存在相关性。方法:按照2015年天津版本的《变应性鼻炎诊断和治疗指南》的诊断要求,从2021年8月到2022年1月之间,选取在四
目的:1.对手术中获取的不同类型的黄斑前膜及内界膜标本通过光镜和电镜进行超微结构观察,从形态学探讨不同类型特发性黄斑前膜（iERM）的发病机制。2.检测不同类型的黄斑前膜患者玻璃体液中血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子（TGF）-β1、促红细胞生成素（EPO）和基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9的表达及黄斑前膜标本中VEGF和TGF-β1的表达水平,从分子水平探讨不同类型iERM的发
目的:探讨中心性浆液性脉络膜视网膜病变脉络膜厚度与体内激素水平的相关性。方法:采用病例对照的研究方法。收集2020年7月至2021年10月在遵义医科大学附属医院眼科门诊通过眼底照相、FFA、ICGA、OCT确诊为中心性浆液性脉络膜视网膜病变的初次发病的男性患者47例作为研究对象,并收集同时期健康青壮年男性15例作为研究对照。研究组进一步根据FFA下荧光渗漏位置距黄斑中心凹的距离分为中心型组和周边型
目的:评估金钗石斛治疗糖尿病视网膜病变（DR）合并干眼的疗效,初步探索可能的抗炎机制;对比DR合并干眼患者与DR未合并干眼患者血清中炎症因子差异,分析炎症机制在糖尿病相关性干眼中的作用。方法:本研究为前瞻性研究。受试者为自2020年8月至2021年12月就诊于遵义医科大学附属医院眼科的糖尿病视网膜病变（小于等于2期）患者38人,分为2组。糖尿病视网膜病变合并干眼（A）组:20人（40眼）,糖尿病视