澳洲坚果属树类坚果,具有很高的营养价值,但是其过敏原蛋白能够引起部分人群产生过敏反应。目前防止过敏的有效方法是避免过敏人群对过敏原的接触,因此,建立澳洲坚果蛋白的有效检测方法具有重要意义。本论文优化建立了澳洲坚果全蛋白的酶联免疫检测方法,并应用于热加工食品中日的蛋白的检测。采用硫酸铵沉淀法提取澳洲坚果全蛋白,并将其作为抗原免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠制备兔多克隆抗体和鼠多克隆抗体。交叉反应实验表明,所制备抗体除能识别开心果和榛果的部分蛋白外,与大豆、核桃、杏仁、花生、腰果和小麦中的蛋白均没有识别,说明所制备抗体特异性较好。利用兔多克隆抗体优化建立了间接竞争酶联免疫方法,抗原包被量为0.025μg/well,封闭液为1%脱脂乳粉,兔抗稀释倍数为1:16000,羊抗兔HRP-酶标二抗稀释倍数为1:20000。该方法的检测限IC15为5.12±0.57 ng/mL,IC50为63.94±0.85 ng/mL。以兔多抗作为捕获抗体,鼠多抗作为检测抗体,优化建立了双抗夹心酶联免疫检测方法,捕获抗体包被量为0.05 μg/well,封闭液为0.5%脱脂乳粉,检测抗体稀释倍数为1:2000,羊抗鼠HRP-酶标二抗稀释倍数为1:20000,方法的线性范围为 3.13ng/mL-30ng/mL,检测限为 0.95±0.17ng/mL,定量限为 3.13±0.57ng/mL。该方法的板内、板间变异分别在1.76%-7.20%和3.83%-12.05%范围内,表明方法具有良好的重现性。将所建立的双抗夹心酶联免疫检测方法应用于焙烤的澳洲坚果和饼干中澳洲坚果蛋白的检测,并对该方法在热加工食品中目标物检测的适用性进行了评价。