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肝癌是常见恶性肿瘤之一,其早期诊断困难且愈后不良。肝癌单克隆抗体的研制为这种难治性肿瘤带来了新的希望。近年来,以单抗为载体的导向化疗,放疗及放免显象诊断,取得了实质性进展。但目前应用的单抗多为鼠源性的,有不少弊端。如果生产出人源性单抗则能更好地应用于基础研究及临床诊断与治疗。本文应用体外致敏人B淋巴细胞的方法制备了分泌人源性抗肝癌McAb的杂交瘤细胞系,并对其McAb特性进行了分析。
1.分泌人源性抗肝癌McAb杂交瘤细胞株的建立以美洲商陆(PWM)体外刺激肝癌病人外周血B淋巴细胞,与小鼠骨髓瘤细胞株NS-1融合,夹心ELISA法筛选产生人Ig的阳性细胞株,之后以活细胞ElISA法筛选与肝癌细胞QGY-7703反应的阳性细胞株,再经微孔细胞免疫化学方法,筛选出与肝癌细胞QGY-7703阳性反应,而与其他癌细胞阴性反应的细胞株,之后再经免疫荧光试验去除与正常细胞如淋巴细胞反应的细胞株,经三次克隆化得到三株较稳定的细胞株AF3、CB7、CH1,其培养上清效价分别为1:128、1:64、1:64。经染色体分析证实为人-鼠杂交瘤细胞。体外培养十二个月后,其分泌抗体效价AF3基本不变,另外两株下降。经液氮冻存后复苏,仍可分泌抗体但效价下降。
2.人源性抗肝癌McAb特性分析三株杂交瘤分泌的McAb均为IgG类免疫球蛋白,其与肝癌细胞QGY-7703可产生阳性反应,并且针对的抗原决定簇不同。三株单抗的补体依赖细胞毒活性与正常人血清IgG相比差异显著,均明显增加。以10倍浓缩的人源性抗肝癌McAb培养上清为一抗,采用免疫组化法先后检测了肝癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌等病理标本组织切片,发现McAb与肝癌组织有较强阳性反应。而和胃癌有较轻微的交叉反应,和其它癌组织无反应。证明了所制备的McAb为抗肝癌人源性抗体,为该抗体的进一步开发利用奠定了基础。