PDECGF特异性RNA抑制片段对膀胱癌作用的研究

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血小板源性内皮生长因子(platelet-derivered endothelial cell growth factor,PDECGF)由血小板产生,其作用主要包括增加DNA合成,提高内皮细胞的迁移能力、刺激肿瘤生长以及促血管形成等,是VEGF超家族中非常重要的成员。近年研究表明,将与mRNA序列相同的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制被称为RNA干扰(RNA interference,RNAi),哺乳动物细胞中RNAi作用越来越引起人们重视,并成为新颖的,重要的基因功能研究手段。RNAi技术得到相当广泛的应用,但在膀胱癌研究方面,应用RNAi技术沉默肿瘤相关基因的报道不多。我们在膀胱癌研究中应用RNAi技术沉默PDECGF基因,观察PDECGF siRNA转染膀胱癌细胞前后人膀胱癌细胞的生物学功能改变。根据血小板源性内皮生长因子基因序列设计和制备PDECGF siRNA;构建含RNA聚合酶启动子III转录载体pRNAT-U6/Neo并能形成发夹结构RNA(small interfering RNA siRNA)的psiPDECGF质粒;用其转染人膀胱癌T24细胞株,观察转染前后PDECGF基因表达及细胞生物学功能的变化;荷瘤裸鼠体内实验以确认在生物体内psiPDECGF质粒是否仍能特异性的沉默PDECGF基因。结果显示PDEC GF siRNA对膀胱癌T24细胞中PDECGF基因表达产生明显抑制作用;转染psi PDECGF-2细胞组PDECGF mRNA水平明显降低,同时caspase-3、P53蛋白水平明显增高;膀胱癌细胞生长及增殖受到明显抑制;癌组织侵袭力显著下降。本研究体外实验证实psiPDECGF-2对T24细胞的增殖有明显的抑制作用,细胞活性明显降低,细胞克隆形成率及细胞迁移率低,这说明转染psiPDEC GF-2的肿瘤细胞其生物学活性下降。这为RNAi技术应用于临床提供了体外实验依据。
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