P-选择素与肠缺血再灌注多器官损伤的研究

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目的:肠缺血再灌注是临床上比较常见的危重症,如肠梗阻、低血压休克等,在病程以及救治过程中可能发生的一个共同的病理生理阶段。近年来有关粘附分子在肠缺血再灌注损伤中作用日益被关注。作为粘附分子家族成员之一的P-选择素,介导活化血小板和炎症细胞与血管内皮细胞的相互作用,可能在肠缺血再灌注中发挥了不可忽视的作用。P-选择素,贮存于内皮细胞的血管棒状小体(Weibel-Palade)和血小板的α颗粒,在受到诸如组胺、凝血酶、白三烯刺激时,立刻作出反应,颗粒移位至细胞表面。研究发现,P-选择素通过介导中性粒细胞和单核细胞在内皮细胞上的滚动和粘附,在炎症发生发展过程中起重要作用。已在许多组织如肾、肝、心、脑缺血再灌注模型中观察到粘附分子P-选择素表达的变化,但对于其在肠缺血再灌注的表达规律,国内尚缺乏实验证据。 缺血预适应(IPC)是指将组织预先置于短时间阻断血流状态可抵抗延长的缺血再灌注的有害作用。此现象在大约十年前首次于心脏被证实,由此成为研究热点。已有研究证实,缺血预适应对心、脑、骨骼肌缺血再灌注损伤有一定保护作用,但目前对于其在小肠方面作用的研究不甚多,有报告显示人们对缺血预适应在小肠缺血再灌注中的作用存在不同意见。本研究的目的在于探讨P-选择素与肠缺血再灌注的关系,以及缺血预适应和P-选择素单克隆抗 甲文摘要体对汤缺血再灌注的作用,并初步探讨缺血预适应机制。 方洁:应用肠缺血再灌注大鼠模型,观察缺血预适应和卜选择素单克隆抗体对血浆及组织卜选择素水平和肠、肝、肺多器官损伤的影响。50只健康据性SD大鼠动物碴机分成5组:肠缺血再灌注组卜 预适应组、单抗组、汤缺血再灌注羊11。假手术经 夹闭扬系膜上动折60分钟祁 ——一’——”“-卜松夹加分钟乍为扬缺血司蓄注模型:夹闭IO分钟和松灭15分钟作为缺血预适应:单抗绘再灌注前5分钟颈静沉内;工射卜选择素单克逞抗久 汤缺血再蓄注组11则注射生理盐水作对照。假手术组只厅麻醉、开腹,irf离杨系膜上动扒,但不夹闭。所有动物于实验结束时开腹取静脉血,采用ELISA检测血浆P-选择素水平。采用免疫组化链菌素抗主素蛋白一主物素酶标法(*S ABAB)检测肠、肝、肺丝织中P-选择素表达。结果判定:以每张切片细胞浆呈i青晰黄揭兰为阳性c宅量分f巳 夫于允镜下井定百无阳性(阳性呈棕黄邑颊粒\ 再利用ImagePro PLUS计算机【像分析系统对阳性表5左区域进行量值化处理。20 xlo视野下每张切片观察扣个视野,以阳性表达面积(平方微米/视野),阳性表达灰度(*)表示卜选择素的表达强度,取其均值作为结果。X镜下观察组织病理变化。汤枯膜损伤按Chl*氏六级评分评价。用统计分析软件包SAS 进行统计学分析,实验数据用均数士标准差(HS)表示,汤损伤分级采用秩和检验比较,组间比较采用单因素方差分析、两两比较采用q检验,显著性水准为a ==0刀5。 结果:hi织HE染2光镜观察。①肠组织HE染色元镜观察:假手术组的肠粘膜绒毛完整,上皮下问隙 中文摘要 无扩张:肠缺血再灌注组的肠粘膜改变最严重,小肠粘 膜充血,间质出血,部分肠粘膜缺损,小肠绒毛有断裂 现象,有些腺体结构不清;单抗组的小肠粘膜充血,间 质出血,部分肠粘膜缺损,小肠绒毛无明显断裂,腺体 结构清楚;缺血预适应组的肠粘膜损伤较单抗组轻,小 肠粘膜充血,腺体结构清楚。缺血预适应组肠粘膜损伤 明显较肠缺血再灌注组 1减轻 o刃.05),单抗组肠粘膜 损伤明显较肠缺血再灌注组11减轻(P<0刀5人 但缺血预 适应组较单抗组肠粘膜损伤更轻仔to.0 5卜②肝组织HE 染色光镜观察:肠缺血再灌注组肝细胞水肿、界限不清, 并可见明显程度不等的空泡变性、水肿及少量点状坏死 灶。缺血预适应组未发现异常改变。单抗组肝细胞无明 显肿胀,亦无变性或坏死,且间质无明显变化。③肺组 织HE染色光镜观察:肠缺血再灌注组肺泡和间质充血、 水肿,出血,炎性细胞浸润,肺泡扩张不均匀,肺泡间 隔增宽。单抗组肺泡和间质充血、水肿、出血减轻,肺 泡扩张较均匀,肺泡间隔变窄。缺血预适应组未发现异 常改变。缺血预适应组、单抗组的肝、肺组织损伤均较 肠缺血再灌注组减轻,缺血预适应组减轻更明显。2.免 疫组化LSAB 法检测肠、肝、肺组织中 卜选择 素的表达:①肠组织中P-选择素的表达缺血再 灌注组(6.0555土0*106,113.61士6.46;5.4718士 0.0094,113.44土 5.86)较假手术组(2.3417 f O.*62,58.72士3.67)显著增高(P<O.0 5)。肠组织中 卜选择素的表达缺血预适应组口.4802土0刀068, 59.33 t 5.23)与缺血再灌注组 1相【 显著降低
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