八肋游仆虫中心蛋白与DNA作用的研究

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DNA (deoxyribonucleic acid),又称脱氧核糖核酸,承载着遗传信息,是生物体中最重要的大分子,通过复制,将遗传信息同样拷贝传递给下一代。细胞内的DNA可能因为物理化学因素包括氧化、水解、烷化、紫外辐射、电离辐射等或者在自身复制过程中受到损伤,使得DNA遭受到各种各样的损伤,包括DNA碱基丢失或改变、核苷酸插入或缺失、DNA链断裂、DNA链间共价交联等。如果这些损伤留在DNA中得不到修复,体细胞就可能丧失功能,而生殖细胞中的DNA损伤可能危及下一代的健康与生活。生物体可以进行自身的DNA损伤修复,DNA修复途径也有多种,例如直接修复、切除修复、重组修复,其中切除修复包括碱基切除修复和核苷酸切除修复。蛋白质和DNA的相互作用在许多生命过程中都发挥着至关重要的作用,例如基因的表达调控、DNA的复制和修复。本文所研究的中心蛋白就在DNA损伤修复中的核苷酸切除修复中发挥一定的作用。蛋白质和DNA之间主要的作用力有氢键、静电作用力和疏水作用力,它们之间大部分以非特异性方式结合,特异性作用主要是由碱基与氨基酸残基之间所形成的氢键所决定。本文选用八肋游仆虫中心蛋白片段分子P23和pBR322DNA.小牛胸腺DNA两种DNA为研究对象,通过荧光、琼脂糖凝胶电泳和GST pull-down三种实验方法初步研究了蛋白与DNA的作用。TNS荧光研究表明,TNS可以与中心蛋白P23的疏水区结合,使得TNS荧光增强,而加入CT-DNA以后,TNS荧光增强更多,表明CT-DNA可以与P23的疏水区结合,使得P23疏水区暴露的更多,Ca2+离子能显著的促进它们作用,但是Tb3+离子由于可以与CT-DNA结合则促进作用不明显。EB荧光研究也证明P23可以与CT-DNA作用,Tb3+离子、Ca2+离子对其结合有促进作用。Tb3+离子荧光结果表明CT-DNA、P23都可以敏化Tb3+离子荧光,且Tb3+离子与P23各部位及DNA结合能力顺序为:P23第三部位>DNA>P23第二结合部位。琼脂糖凝胶电泳实验研究证明中心蛋白P23可以对pBR322DNA产生切割作用,表明中心蛋白在DNA损伤修复中可能有一定的作用。中心蛋白结合不同金属离子后对PBR322DNA切割实验表明,Tb3+离子、Ca2+离子对P23切割pBR322DNA有促进作用,且促进作用Ca2+>Tb3+。通过自由基捕捉实验初步判断P23切割pBR322DNA为水解切割。文中还通过分子生物学上常用来研究蛋白-蛋白相互作用的一各,实验方法—GST pull-down实验技术研究了中心蛋白与CT-DNA的作用,得出与之前相同的结论,中心蛋白片段分子P23在一定条件下可以结合CT-DNA,且Ca2+能显著促进其作用,而Tb3+离子则没有表现出明显的促进作用。
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