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茶多酚(Tea polyphenols,TP)是茶叶中的多酚类物质,拥有抗氧化、抗癌症、调节免疫器官的发育和免疫系统、增加肠道有益菌、抑制和杀死引起腹泻的各种病原菌并减缓肠胃紧张和消炎止泻等作用。产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)K88是导致新生仔猪腹泻的重要病因之一,它可以通过自身的黏附素黏附到肠上皮细胞进而破坏肠上皮屏障并引发一系列的炎症反应。有研究表明,茶多酚能够有效抵抗肠道致病菌的感染,并能通过调节Toll样受体的表达来调节诱导损伤模型动物免疫器官的生长发育和缓解其机体损伤,但它能否抵抗ETEC K88的感染及减缓其引起的肠道炎症反应,目前还未见报道。本文通过体外细胞试验和小鼠体内试验研究茶多酚对猪肠上皮屏障功能和炎症反应的影响,具体内容如下:1.茶多酚对大肠杆菌K88生物学特性的作用及与IPEC-J2细胞互作条件的摸索体外抑菌试验表明TP具有抑菌活性,对ETEC K88的MIC值为5.0 mg/m L,MBC值为10.0 mg/m L,且TP能明显抑制ETEC K88对IPEC-J2细胞的粘附。同时摸索了TP-IPEC-J2-ETEC K88互作的最佳条件:0.5 mg/m L的TP预处理IPEC-J2细胞3 h后,再用ETEC K88 MOI=10,感染细胞3 h。2.茶多酚调节感染大肠杆菌K88的IPEC-J2细胞屏障功能的研究通过q-PCR和Western blotting分别检测TP对感染ETEC K88的IPEC-J2细胞紧密连接蛋白表达的影响,结果显示:与ETEC K88感染组对比,TP能够明显抑制ETEC K88诱导的IPEC-J2细胞紧密衔接蛋白Claudin-1的表达下调,对ZO-1和Occludin的表达无显著影响。说明TP可以减缓ETEC K88对IPEC-J2细胞中紧密连接蛋白Claudin-1的损坏。3.茶多酚调节感染大肠杆菌K88的IPEC-J2细胞炎症反应的研究通过q-PCR检测TP处理后感染ETEC K88的IPEC-J2细胞炎症反应相关基因、细胞中TLR2、细胞Toll样受体信号通路负调控因子等m RNA表达情况,结果发现:TP可以明显抑制细胞中抗炎性细胞因子IL-10、TLR2和TLR信号通路负调控因子TOLLIP和A20的表达下调;抑制促炎性细胞因子IL-2、IL-6、IL-8的表达上调,上调促炎性细胞因子TNF-α的表达;对TLR信号通路负调控因子IRAKM的下调和细胞中抗炎性细胞因子TGF-β,TLR信号通路负调控因子Bcl3的表达均无影响。推测TP可能是通过调节细胞中炎症因子的表达及TLR信号通路来调节炎症反应。4.茶多酚对感染ETEC K88小鼠炎症反应的作用研究通过构建小鼠炎症模型发现,对比感染ETEC K88对照组小鼠,TP添加组感染ETEC K88的小鼠临床症状减轻,剖解发现肠道无明显变化;HE染色显示肠道黏膜层上皮细胞轻度变性;血清中TNF-a的表达明显上调、IL-6的表达明显下调。说明TP可以减缓ETEC K88感染小鼠的炎症反应。