目的建立快速检测和辅助诊断布鲁氏菌病的实时荧光定量PCR检测方法,并应用于布鲁氏菌病的疫情监测和早期发现。方法:1.根据布鲁氏菌外膜蛋白omp10和omp31的碱基序列,运用Primer Premier 5.0软件设计4对引物和探针,即omp10、omp10-1、omp31和omp31-1,并交由上海辉睿生物科技有限公司合成;2.应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,将设计的引物和探针分别用于检测6个种类的19份已知生物型的标准布鲁氏菌株DNA、10份云南玉溪分离的布鲁氏菌的DNA和224份阴性对照菌株DNA,包括35份巴尔通体菌、103份小肠结肠炎耶儿森菌(其中包括4份O:3型和9份O:9型)和86份杂菌,根据检测结果评价引物和探针的特异性;3.将建立的快速检测技术用于检测20株云南分离的布鲁氏菌的DNA、20份布鲁氏菌抗体阳性患者全血DNA和160份疑似布病患者全血DNA。结果1.omp10和omp10-1能对布鲁氏菌19种生物型标准菌株DNA进行扩增,且omp10的扩增曲线和Ct值均优于omp10-1;omp31-1能扩增布鲁氏菌16种生物型标准菌株的DNA,而omp31则不能扩增布鲁氏菌标准菌株的DNA。2.omp10、omp10-1和omp31-1均能扩增云南玉溪分离的10株布鲁氏菌的DNA,而omp31则不能扩增;omp10、omp10-1和omp31-1对阴性对照菌株均不能扩增。3.选择omp10引物及其探针建立的快速检测技术能扩增云南分离的20株布鲁氏菌的DNA和20份布病患者全血DNA,对160份疑似布病患者全血DNA部分扩增。结论以omp10引物及其探针建立起的实时荧光定量PCR检测技术能用于布鲁氏菌的快速检测和布病疫情监测,以及临床的辅助诊断。