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目的:E2F3是参与DNA复制、细胞周期进展转录激活因子,它可以编码两个蛋白产物E2F3a和E2F3b。已有研究表明,它在多种肿瘤中扩增或过度表达,包括膀胱癌、前列腺癌、肺癌和乳腺肿瘤等,已经有以E2F3为靶点设计的肿瘤基因治疗实验研究,并获得了初步的结果。但国内外对其在肺癌生物学功能的研究很少。本实验重点研究E2F3a在肺腺癌A549细胞中的表达情况,观察转染前后肺腺癌A549细胞的形态学变化,检测基因转染前后E2F3a在细胞中的表达情况,分析E2F3a在肺癌发生中的作用机制,为肺部恶性肿瘤的临床治疗提供新的理论依据。分析肺癌病例,探讨影像学检查对肺癌早期诊断与及时诊断的临床价值。方法:本实验将人工合成的抑制E2F3a基因的siRNA片段,通过脂质体瞬时转染入人肺腺癌A549细胞内,倒置显微镜下观察其形态学变化,RT-PCR检测E2F3amRNA的表达,Western blot检测E2F3a蛋白水平,同时检测转染后A549细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平,探讨转染E2F3a siRNA后,对凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。CCK8、流式细胞技术检测A549细胞的增殖状况与凋亡情况的改变。选择3例肺癌病例临床分析,将影像学检查与病理报告对比,探讨影像学检查对早期与及时诊断肺癌的准确性。结果:倒置显微镜观察转染前后细胞形态的变化:转染前,细胞贴壁生长,状况良好,多呈梭形,大小适中,核仁清晰。转染后48小时细胞皱缩,贴壁不佳。(1)RT-PCR检测E2F3a mRNA的表达,结果表明,E2F3a siRNA作用于A549细胞48h后E2F3a mRNA表达明显下调,而Control组、Negative Control组E2F3amRNA水平无明显变化。(2)Western blot检测E2F3a蛋白表达,结果表明,E2F3asiRNA作用于A549细胞48h后E2F3a蛋白表达明显下调,而Control组、NegativeControl组E2F3a蛋白水平无明显变化。(3)Western blot检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,结果表明,E2F3a siRNA作用于A549细胞48h后Bcl-2蛋白表达明显下调,Caspase-3蛋白表达明显上调,而Control组、Negative Control组Bcl-2、Caspase-3蛋白水平无明显变化。(4)流式细胞术检测细胞凋亡:结果显示,siRNA转染组细胞凋亡率为(15.02±1.7)%,Control组为(4.24±1.03)%,Negative Control组为(5.43±0.81)%,siRNA转染组与Control组、Negative Control组比较差异具有统计学意义(P<0.05),Control组与Negative Control组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(5)CCK检测细胞增殖:在24h、48h、72h三个时间点,E2F3a siRNA干扰组的吸光度分别为0.86±0.52、1.21±0.33、2.01±0.40,Control组细胞的吸光度值分别为1.34±0.23、2.67±0.14、3.97±0.32,Negative Control组细胞的吸光度值分别为1.27±0.18、2.52±0.26、1.21±0.24,siRNA转染组与Control组、Negative Control组比较差异具有统计学意义(P<0.05),Control组与NegativeControl组比较差异无统计学意义(P>0.05),转染E2F3a siRNA可以诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,减缓细胞增长率。3份影像学结果与病理报告一致,影像学检查可作为早期与及时发现肺癌的重要手段。结论:应用RNA干扰技术下调E2F3a基因的表达,可以抑制A549细胞增殖,促进调亡,E2F3a可能成为肺癌基因治疗的一个新靶点。影像学检查在早期发现肺癌病人,及时诊断与及时治疗有重要意义。