【摘 要】
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抗菌肽是动植物中普遍存在的一种具有抗微生物活性的多肽,它能杀死动植物体内的多种病原微生物.该研究首先构建了mBin1b的cDNA真核表达载体和mBin1b-GFP融合表达载体在COS7细
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抗菌肽是动植物中普遍存在的一种具有抗微生物活性的多肽,它能杀死动植物体内的多种病原微生物.该研究首先构建了mBin1b的cDNA真核表达载体和mBin1b-GFP融合表达载体在COS7细胞中进行了瞬时转染,RT-PCR和荧光蛋白表达实验证实在COS7细胞中得到了表达.并证明了它的抗菌活性,为进一步利用转基因小鼠研究它在体内的功能,便于跟踪导入基因的表达,构建了mBin1b C端融合HA抗原决定簇的真核表达载体,结果表明融合蛋白的抗菌活性有所下降但仍保留了较强的抗菌活性,这说明mBin1b的C端结构参与抗菌活性,但该实验这一改变可能对mBin1b参与抗菌活性的总体空间结构没有很大影响.我们试图通过建立在附睾组织中过度表达mBin1b的转基因小鼠,来研究附睾中过量存在的mBin1b对小鼠雄性生殖功能的影响.研究中利用Tet-on系统<[2]>和附睾专一表达基因mE-RABP的5kb的启动子<[3]>来精确调控转入基因的表达.ME-RABP启动子可以控制rtTA在转基因小鼠附睾中的表达.在mBin1b-HA的转基因小鼠中,该基因的表达受控于TRE启动子,该启动子在有rtTA和四环素(或其衍生物)同时存在下才可转录其下游基因.通过原核显微注射和PCR,Southern杂交鉴定,已经获得了上述两种转基因阳性小鼠,各有8只转基因阳性的建立者(founder),正在繁殖和育种过程中.在它们的子代中已获得可遗传的转基因阳性的小鼠,将这两种小鼠杂交已获得了部分rtTA和mBin1b-HA双阳性的转基因小鼠,即可以用四环素或其衍生物诱导mBin1b-HA在际睾中过量表达,进一步的表型分析正在进行中.此研究为以后进行mBin1b的RNAi转基因小鼠的建立提供了基础.
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