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第一部分LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体的制备及体外寻靶检测目的:构建LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体,并检测该耦联体对卵巢癌A2780/DDP细胞的体外寻靶能力。方法:1、采用薄膜-超声分散法制备普通紫杉醇脂质体、生物素化紫杉醇脂质体及LHRHa靶向紫杉醇脂质体,测定生物素化紫杉醇脂质体粒径电位,透射电镜考察其形态,高效液相色谱法测定三种紫杉醇脂质体包封率。将荧光素NBD标记的胆固醇加入原料中制备NBD标记的生物素化脂质体,为荧光鉴定实验准备。2、机械振荡法制备生物素化脂质微泡,测定其浓度、粒径和电位。3、通过生物素-链霉亲和素桥接法制备LHRHa靶向脂质体-微泡耦联体,激光共聚焦观察脂质体与脂质微泡耦联体形态,流式细胞仪检测耦联效率,荧光显微镜下观察LHRHa靶向脂质体-微泡耦联体对卵巢癌A2780/DDP细胞的体外寻靶能力。结果:1、采用薄膜超声法制备的普通紫杉醇脂质体,生物素化紫杉醇脂质体及LHRHa靶向紫杉醇脂质体,粒径均较均匀,其中生物素化紫杉醇脂质体平均粒径为120.5nm。制备的三种脂质体包封率均大于90%。2、采用机械振荡法制备的生物素化微泡一般形态显示良好。平均粒径1208nm。3、以生物素-链霉亲和素连接法制备的LHRHa紫杉醇脂质体-微泡耦联体有良好的形态。流式细胞仪检测耦联效率显示100μl浓度为10mg/ml的脂质体加入到个数约为2×107的微泡中时,微泡携带的脂质体量达到最大。经HPLC检测制备的1×109个脂质体-微泡耦联上载紫杉醇约1.6mg,体外寻靶实验显示LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体能与LHRH受体阳性的A2780/DDP细胞特异性结合,而非靶向的耦联体则不能与细胞结合。结论:采用生物素-链霉亲和素方法可以成功制备LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体,该靶向耦联体具有体外寻靶能力。第二部分超声介导LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体对卵巢癌A2780/DDP细胞的体外杀伤作用目的:探讨超声介导LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体对体外培养的卵巢癌A2780/DDP细胞的生长抑制及调亡诱导作用。方法:体外培养人卵巢癌A2780/DDP细胞,根据不同处理因素分为8组:1.空白组;2.空白脂质体-微泡组;3.紫杉醇组;4.紫杉醇脂质体组;5.靶向紫杉醇脂质体组;6.靶向紫杉醇脂质体-微泡组;7.靶向紫杉醇脂质体+超声组;8.靶向紫杉醇脂质体-微泡+超声组。应用MTT比色法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,透射电镜观察LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体联合超声作用后细胞超微结构的变化。结果:随着作用时间的延长,细胞的存活率逐渐下降。靶向紫杉醇脂质体-微泡联合超声组的细胞存活率最小,24h、48h、72h细胞存活率分别为(52.32±2.85)%、(35.30±1.27)%、(23.22±2.11)%,与其他处理组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。细胞凋亡检测发现超声联合靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体作用24h细胞凋亡率达(37.15±1.01)%,与其他组相比,差别有统计学意义(P<0.05)。透射电镜检测发现与对照组相比靶向紫杉醇脂质体-微泡+超声处理组细胞出现明显凋亡现象,表现为胞核固缩,核染色质边集形成凋亡小体。结论:超声介导LHRHa靶向紫杉醇脂质体-微泡耦联体能有效抑制卵巢癌A2780/DDP细胞的生长及诱导细胞凋亡。有望成为一种有效的卵巢癌靶向治疗新方法。