血栓类疾病是威胁人类生命健康的头号杀手。血栓形成后会对脑、心脏、肺等血液循环系统造成栓塞,从而导致多种疾病,如冠心病、脑血栓、动脉硬化等。血栓性疾病由于其致残、致死率非常高,所以一直是医学领域研究的重点和难点。血栓性疾病的发病与年龄相关,随着我国老龄化问题的日益严重,血栓类疾病的预防和治疗显得尤为重要。溶栓是血栓类疾病最有效、应用最广的治疗与预防方法之一。通过溶栓药物的应用以达到溶解治疗血栓的目的。目前临床上应用的主要溶栓药物有尿激酶(UK)、链激酶(SK)和组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)等。这些溶栓药物虽然溶栓效果明显,但依然存在半衰期较短、价格昂贵等缺点,所以仍需要寻找疗效好、安全、经济的溶栓药物。溶栓酶广泛来源于动物、植物和微生物。微生物作为溶栓酶药物的来源,具有培养容易、产量高、所需设备简单等优点,一直都是溶栓药物研究开发的一个重点。本研究在实验室前期工作的基础上,对枯草芽孢杆菌发酵液中的溶栓酶进行分离纯化。建立了硫酸铵盐析、离子交换层析的纯化方法,制备了较纯的枯草芽孢杆菌溶栓酶。研究了酶的稳定性及降解特异性。在此基础上,初步研究该酶在动物体内的溶栓活性。研究结果如下：1.纯酶样品的制备：将发酵液用60%饱和度的硫酸铵进行盐析,离心收集蛋白沉淀,溶解后,在醋酸盐缓冲液(0.02 M pH 5.6)中透析。样品透析后经阳离子交换层析(CM-sepharose Fast Flow)进行进一步分离纯化,制得纯化酶制品。通过蛋白质电泳(SDS-PAGE)和酶活检测,评价与检测纯化过程中溶栓酶组分的纯度及活性。2.稳定性及降解特异性研究：在不同温度(4℃、37℃)下,研究该酶在溶液状态下的稳定性。结果发现,在4℃条件下,酶活在9天的降解实验中保留了90%的活性。而在37℃条件下,在9天降解实验中,其酶活在前3天迅速下降,5天后基本没有检测到酶活。说明该酶在4℃条件下具有较好的稳定性。此外,通过纤维蛋白“加热”平板实验,发现该酶具有直接降解纤维蛋白的能力。3.体内溶栓活性的初步研究：初步的体内溶栓研究表明,该酶在体内具有较强的溶栓效果。该酶通过股静脉注射40分钟后,取实验动物血液,待血液凝固后,药物注射组仍具有良好的溶解血栓能力,显微镜下观察红细胞形态完整,溶解血栓能力与酶浓度呈正相关。