块菌(truffles),又名松露,是世界三大美食之一。在我国主要分布于西南的四川和云南,西北的新疆和西藏等地。目前,对于块菌多糖的生物学活性研究较少,为了进一步了解块菌多糖的免疫学活性,本文以产自四川省攀枝花市的中国块菌(Tuber sinense K. Tao et Liu)干燥子实体为原材料,对其中水溶性多糖的提取工艺、分离纯化方法进行了研究。对块菌多糖的体内外抗氧化能力、对免疫系统的调节作用及调节巨噬细胞作用的具体机制进行了较为系统的研究。具体来讲,论文内容主要包括了以下几个部分：1.块菌子实体多糖的提取工艺优化块菌子实体粉末经95%乙醇脱脂、烘干后,采用水提醇沉法提取其中的多糖成分。根据单因素试验结果,利用响应面分析法(response surface methody)对提取温度、水料比、提取时间三个因素进行优化,最终得到的优化提取条件为提取温度95℃、水料比16.4：1、提取时间2.7h,提取3次,实际提取率可达10.23%。经最优提取方案得到的块菌粗多糖(CTP)粉末为土黄色,其多糖、蛋白质、糖醛酸、硫酸基含量分别为42.79%、6.19%、1.43%、3.10%。2.块菌粗多糖(CTP)的体内外抗氧化作用对CTP的体外抗氧化活性研究结果显示,CTP在体外表现出较强的清除超氧阴离子和羟自由基能力,呈浓度依赖性,但还原力较弱。CTP的体内抗氧化实验结果显示,CTP能提高免疫抑制小鼠的血清SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量；能显著提高肝脏SOD活力,对GSH-Px活性无明显影响,但可升高肝脏MDA含量。3.块菌粗多糖的免疫调节作用体外实验结果表明CTP直接和协同LPS刺激对小鼠脾淋巴细胞增殖的作用较差,协同ConA的促淋巴细胞增殖作用较好。能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力并促进NO合成。体内实验结果表明CTP能提高免疫抑制小鼠的胸腺指数,对脾脏指数影响不大；能显著提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力；能显著提高外周血中红细胞数量,提高血红蛋白含量；还能增加外周血白细胞数量,但作用不显著(p>0.05)。4.块菌多糖的分离纯化采用AB-8型大孔吸附树脂对CTP进行脱色,当树脂用量为1g/mL,多糖浓度为4mg/mL,提取时间为4h,温度为40℃时,多糖脱色率可达61.12%,同时能脱去部分蛋白质,脱蛋白率为46.87%,多糖保留率为70.58%。将脱色处理后的块菌多糖通过DEAE-Sepharose FF阴离子交换树脂进行进一步分离纯化,得到一个水溶性的中性多糖WSTP。WSTP中的蛋白质已经被完全除去,多糖含量为91.63%,高效液相色谱分析显示其中含两个多糖组分,重均分子量(Mw)分别为1020620 Da、30080Da。5. WSTP对巨噬细胞RAW264.7的影响以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为模式细胞,研究WSTP对其功能的影响。作用24h后,块菌多糖能显著改变巨噬细胞RAW264.7的外部形态,细胞体积明显增大,细胞质增多,细胞的数量明显减少,效果与LPS相当。WSTP能提高RAW264.7产生NO的量,且呈现浓度依赖性。多糖作用时间对NO生成量具有明显影响,随着作用时间的延长,NO的生成量明显增加；能呈浓度依赖性地促进RAW264.7分泌IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子。6. WSTP对巨噬细胞RAW264.7mRNA表达的影响采用荧光定量PCR法研究不同作用浓度、不同作用时间,WSTP对RAW264.7中IL-lα、IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达的影响。结果当浓度在10-200μg/mL范围内,块菌多糖WSTP能呈浓度依赖性地促进巨噬细胞RAW264.7IL-1α、IL-1β、IL-6、 TNF-a mRNA的表达,当浓度在100-200μg/mL时,促细胞因子mRNA表达的作用与LPS相当。在24h内,WSTP促进RAW264.7 IL-1α、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达的能力最强；48h时,促IL-lα、IL-1β、IL-6mRNA表达能力明显下降、但TNF-a mRNA的表达量下降不明显。