鸽Ⅰ型腺病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

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鸽Ⅰ型腺病毒(Pigeon adenovirus type Ⅰ,PIAd Ⅴ-Ⅰ)作为一种接触性传染性的病原,传播范围广、发病率高,尤其针对赛鸽而言,训放过程中处于高度应激状态的赛鸽因免疫抑制从而成为易感动物。20世纪70年代就已经诊断出PIAd Ⅴ-Ⅰ感染的散在病例,但直到1984年Cousement等才首次叙述了在比利时发现的只发生于鸽的临床疾病——PIAd Ⅴ-Ⅰ。在此之后PIAd Ⅴ-Ⅰ感染已不只局限在某一区域发生,而是在全世界范围内开始传播并被广泛报道,并且对鸽养殖业的健康发展带来了巨大影响。本研究根据Gen Bank公布Pi Ad Ⅴ-ⅠFiber 2基因序列,利用引物设计软件Primer 5.0设计特异性扩增引物,通过对反应程序及体系优化建立了Pi Ad Ⅴ-ⅠPCR检测方法,并使用该方法对呼和浩特地区Pi Ad Ⅴ-Ⅰ的感染及流行情况进行了初步的分子流行病学调查,测序获得一段Fiber 2基因保守序列,长度为967 bp,对该序列进行遗传进化分析后,确定其为禽腺病毒A种1型。以此为基础,建立了Pi Ad Ⅴ-ⅠSYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并通过临床样板的检测与普通PCR进行对比,结果表明实时荧光定量PCR方法比普通PCR方法灵敏100倍。
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