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菊粉是由果糖通过β-2,1-糖苷键连接而成的线性直链多糖,末端以α-1,2-糖苷键连接一个葡萄糖残基。菊粉酶能水解β-2,1-糖苷键,其中菊粉内切酶能作用于菊粉内部的β-2,1-糖苷键,产生低聚果糖,菊粉外切酶能从菊粉非还原性末端催化水解产生单糖。本文以菊粉降解菌Paenibacillus sp.Lfos16为出发菌,从其基因组中克隆出两段菊粉酶基因,分别为菊粉酶基因inu-1及菊粉酶基因inu-2。其中inu-1的ORF全长为2274bp,GC%含量为51.67%,编码757个氨基酸,属于糖苷水解酶32家族,与来源于Paenibacillus polymyxa DSM365的糖苷水解酶的具有98%的同源性;inu-2的ORF全长为2265bp,GC%含量为49.49%,编码754个氨基酸,属于糖苷水解酶32家族,与来源于Paenibacillus polymyxa F2的糖苷水解酶具有99%的同源性。分别将inu-1、inu-2重组到表达载体pET-28a(+),并通过大肠杆菌表达宿主E.coli BL21(DE3)进行异源表达。利用组氨酸标签纯化重组酶Inu-1和Inu-2,并对其进行酶学性质的研究。其中重组Inu-1的表观分子量为88kDa,粗酶液比酶活为46.07U/mg,其水解菊粉主要产物为F3,其中以醇沉菊粉为底物的终产物中F3质量分数达到78.5%,因此重组Inu-1为菊粉内切酶。经纯化后,重组Inu-1比酶活为185.16U/mg,纯化倍数达到4.02。重组Inu-1最适作用温度为35oC,且当温度低于45oC时酶活较稳定。最适作用pH为7,且当pH在7-8时菊粉酶保持较高酶活。Ca2+、Mn2+对重组Inu-1有明显的激活作用,而Ag+、Cu2+、Zn2+、Hg2+、Fe2+及Fe3+对重组Inu-1具有显著抑制作用。重组Inu-1对醇沉菊粉的Vmax为0.14mg/(mL·min),Km为19.91mg/mL。重组Inu-2的表观分子量为87kDa,粗酶液的比酶活为87.43U/mg,且I/S为0.499,水解菊粉的主要产物为果糖,因此重组Inu-2为菊粉外切酶。经纯化后,重组Inu-2比酶活为348.30U/mg,纯化倍数达到3.98。重组Inu-2最适作用温度为40oC,且当温度低于30oC时酶活较稳定;最适作用pH值为6,且当pH在6.6-7.6时菊粉酶保持较高酶活;Mg2+、Ca2+及Fe2+对Inu-2有一定的抑制作用;Ag+、Cu2+、Zn2+、Hg2+、Fe2+、Fe3+对重组Inu-2具有显著抑制作用。重组Inu-2对醇沉菊粉的Vmax为0.18mg/(mL·min),Km为19.28mg/mL。