【摘 要】
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第一部分:不同提取方式对木蝴蝶植物化学成分及生物活性的影响目的:采用多变量分析评估不同提取技术对木蝴蝶植物化学成分及生物活性的影响。方法:以70%乙醇为溶剂,通过不同提取技术获得木蝴蝶提取物,包括超声辅助提取（UAE）、浸渍提取（ME）、组织破碎提取（TSE）、索氏提取（SOXE）和快速溶剂提取（ASE）,采用UHPLC-DAD Orbitrap Elite MS法表征提取物中的黄酮类化合物,同时
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第一部分:不同提取方式对木蝴蝶植物化学成分及生物活性的影响目的:采用多变量分析评估不同提取技术对木蝴蝶植物化学成分及生物活性的影响。方法:以70%乙醇为溶剂,通过不同提取技术获得木蝴蝶提取物,包括超声辅助提取（UAE）、浸渍提取（ME）、组织破碎提取（TSE）、索氏提取（SOXE）和快速溶剂提取（ASE）,采用UHPLC-DAD Orbitrap Elite MS法表征提取物中的黄酮类化合物,同时对提取物中的四种主要的黄酮类化合物进行定量分析,并测定提取物中的总生物活性成分含量（总酚含量（TPC）和总黄酮含量（TFC））、抗氧化活性（ABTS、DPPH、CUPRAC、FRAP、总还原能力和总抗氧化能力）和酶抑制活性（α-葡萄糖苷酶和酪氨酸酶）,最后采用多变量分析综合评价提取方法带来的化学特征和生物学特性的差异。结果:通过UHPLC-DAD Orbitrap Elite MS方法,从提取物中共鉴定出28种黄酮类化合物。SOXE提取物中木蝴蝶苷B的含量最高（16243.03±45.72μg·g-1）,ASE提取物中木蝴蝶苷A的含量最高（30926.33±539.32μg·g-1）,UAE提取物中黄芩素和白杨素的含量最高（分别为6749.01±118.31μg·g-1和3440.70±15.40μg·g-1）。SOXE获得的提取物具有最高的TPC（50.99±1.78 mg GAE·g-1）,ASE提取物具有最高的TFC（34.92±0.38 mg RE·g-1）。所有提取物都对α-葡萄糖苷酶和酪氨酸酶有抑制活性,其中UAE、ME和SOXE提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性最高（IC50:1.23~1.35 mg·m L-1）且没有显著差异（P﹤0.05）,使用UAE获得的提取物是最有效的酪氨酸酶抑制剂,其次是SOXE、TSE、ASE和ME提取物,IC50值分别为19.80±0.13 mg·m L-1、22.38±1.07 mg·m L-1、29.34±1.06 mg·m L-1和33.45±2.19 mg·m L-1。多变量分析表明,5种提取技术可以被有效的区分开,其中SOXE和ASE为一组,UAE和TSE为一组,而只有ME单独为一组;SOXE和ASE提取物因TFC/TPC高而具有最强的抗氧化活性;总抗氧化能力、CUPRAC、总还原能力、酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性的VIP﹥1,对提取方式具有最高的区分能力。结论:每种提取方法都可以有效的提取木蝴蝶中具有生物活性的化学成分。不同提取技术会显著地影响木蝴蝶的植物化学特征和生物学特性,应根据应用目的的不同选择最合适的提取条件。木蝴蝶展现了预期的生物学潜力,本研究收集的数据可为进一步开发木蝴蝶在制药、食品或化妆品行业的潜在应用提供实验依据。第二部分:离线二维液相色谱-质谱联用法筛选木蝴蝶中5-脂氧化酶和环氧化酶-2双靶抑制剂目的:建立快速筛选木蝴蝶提取物中5-脂氧化酶/环氧化酶-2双靶抑制剂的方法。方法:采用离线二维高效液相色谱-质谱联用技术对木蝴蝶提取物中的5-脂氧化酶/环氧化酶-2抑制剂成分进行快速筛选。首先将提取物与5-脂氧化酶/环氧化酶-2一同孵育,并对孵育条件进行了优化。孵育结束后对混合液进行离线二维筛选,通过比较活性组、空白组与灭活5-脂氧化酶/环氧化酶-2组的色谱图,分析潜在的抑制剂成分。此外,采用体外酶抑制实验与分子对接技术进一步验证。结果:共有9种化合物被确定为潜在的5-脂氧化酶/环氧化酶-2抑制剂,体外活性测定表明,木蝴蝶苷B、黄芩素、木蝴蝶苷A和白杨素对5-脂氧化酶/环氧化酶-2有较强的抑制作用（IC50≤154.6μmol·L-1）,同时通过分子对接技术进一步阐明了配体与酶活性位点之间可能的作用机制。结论:离线二维液相色谱-质谱联用技术是一种从天然产物中筛选和分析生物活性化合物的快速、有效和准确的方法。
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