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盾壳霉(Coniothyrium minitans)是植物病原菌核盘菌(Scleroinia sclerotiorum)的重寄生真菌。小RNA调控通路广泛存在于高等和低等生物体内,其中Dicer酶在小RNA的加工过程中起重要的剪切作用,AGO蛋白则是小RNA行使功能的RNA诱导沉默复合体(RNA induced silencing complex, RISC)中的重要成员。这些基因在动植物以及部分真菌中的功能已有研究报道,但在盾壳霉中这些基因的功能尚不明确,本文对盾壳霉的AGO、DCL1及DCL2基因的功能进行了相关研究。首先我们通过RT-PCR证实了CmAGO、CmDCL1和CmDCL2在盾壳霉的生长和产孢等阶段均有表达。根据同源重组的原理构建了这三个基因的敲除载体,通过农杆菌介导转化盾壳霉分生孢子,经PCR和Southern杂交验证分别得到了3个CmAGO敲除转化子,4个CmDCL1敲除转化子和8个CmDCL2敲除转化子。构建了相关基因的互补载体,并得到了3个CmDCL2基因的互补转化子。进一步研究表明,在PDA培养基上,CmAGO、CmDCL1和CmDCL2敲除转化子的菌落、菌丝及孢子形态与出发菌株ZS-1相比均无显著差异,但生长速度、寄生致腐核盘菌菌核能力均显著低于出发菌株ZS-1；产孢量、产抗真菌物质能力均显著高于出发菌株ZS-1; CmAGO敲除转化子孢子萌发速率显著高于出发菌株ZS-1；核盘菌Ep-1PNA367与三个基因敲除转化子对峙培养时,两菌菌丝融合会促进敲除转化子在交界处产孢增加；CmAGO和CmDCL2敲除转化子与带病毒的灰霉菌Bc10HN454菌株对峙培养可获得病毒,CmAGO和CmDCL2敲除转化子感染BcHV/10HN454和BcTV/10HN454病毒后,表型发生显著变化,CmDCL2敲除转化子产孢量明显减少,CmAGO敲除转化子不产孢。CmDCL2互补转化子在生物学性状各方面测定中均与出发菌株ZS-1无显著差异。上述研究结果表明CmAGO、CmDCLl和CmDCL2基因在盾壳霉的生长发育和寄生核盘菌等方面发挥重要作用。