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目的:通过对非特异性探针Cy5.5在裸鼠体内分布及显像研究,探讨近红外荧光成像对肺癌的早期诊断及动态监测价值。
方法:用A-549细胞株建立肺癌动物模型,在无菌条件下,取细胞悬液0.2 ml(4×106个)于35只裸鼠右前肢背部皮下异位接种。待接种后的第三天开始显像实验,每24h成像一次。15只成瘤裸鼠用于早期成像,分别在探针注入前及注入30分钟后对感兴趣区进行近红外荧光成像,取三处对应的像素点测其荧光光子数及荧光寿命,取平均值。分别对肿瘤与对侧背部的平均荧光光子数及荧光寿命行配对t检验。测量肿瘤信号的垂直长径与宽径。成像结束后,猝死裸鼠,切取肿瘤组织用游标卡尺测定瘤体的直径,并做病理学检查。25只裸鼠用于动态成像(其中5只为无瘤裸鼠),成像准备同肺癌移植瘤的早期检测。在注入荧光团后的30、45、60、90、120分钟成像,之后每24小时成像一次,直至肿瘤部位无肿瘤荧光信号,测量各时间点肿瘤部位及其对称部位的平均荧光光子数及荧光寿命,并做配对t检验。对动态成像的25只裸鼠待体内Cy5.5完全代谢后,重新注入荧光燃料,在注入探针后的上述时间点分别猝死5只裸鼠,剥离肿瘤、及主要器官(心脏、肝脏、肾脏、胃、脾脏),用磷酸盐缓冲液冲洗后(胃需清除内容物)用上述方法立即进行近红外光成像,测得平均荧光强度。以心脏的荧光信息反映循环血的荧光强度。
结果:裸鼠肺癌移植瘤模型的成瘤率100%。肺癌移植瘤的早期成像:接种后平均5±2天,肿瘤部位与其对称部位荧光光子数配对t检验,t=6.673(P<0.05)。平均荧光寿命高于对照部位.t=3.784(p<0.05)。近红外荧光成像仪测得瘤体平均大小为2.807×3.045mm,经游标卡尺测得的平均直径为2.547mm。二者旱直线相关,r=0.924(P<0.05)。20只裸鼠右前肢背部皮下移植瘤成像清晰,边界清楚,瘤体荧光信号强度明显高于周围正常组织荧光信号。肿瘤的荧光强度及荧光寿命始高于对照部位,差别具有统计学意义。离体近红外荧光成像:注入探针60分钟后,肿瘤部位荧光强度始高于血液(P<0.05),90分钟时达峰值。随时间延长肾脏的荧光强度逐渐增加。
结论:裸鼠肺癌移植瘤的早期成像表明近红外荧光成像可发现微小肿瘤病变,其敏感性高,表明近红外荧光成像是早期发现肺癌的行之有效的影像学方法。
裸鼠肺癌移植瘤的动态成像表明,Cy5.5在肿瘤内的积聚时间远远超过体内代谢时间,近红外荧光成像能够区分肿瘤与正常组织。
荧光寿命可用于鉴别不同的组织器官;并可判定肿瘤的不同代谢状态。