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补肾中药干预MES23.5多巴胺能神经细胞凋亡的研究研究目的：本课题旨在研究补肾中药淫羊藿、菟丝子、肉苁蓉对H202氧化损伤的MES23.5多巴胺能神经细胞的形态、细胞凋亡因子、神经营养因子(Neurotrophic Factors, NTFs)的影响,探讨补肾中药改善MES23.5多巴胺能神经细胞凋亡的可能机制。研究方法：1.实验对象：将对数生长期MES23.5多巴胺能神经细胞分为：空白对照组、模型对照组、淫羊藿组、菟丝子组、肉苁蓉组、司来吉兰组六个组。空白对照组不造模,用含25%大鼠空白血清配成培养液培养；模型对照组、淫羊藿组、菟丝子组、肉苁蓉组、司来吉兰组用100umol/L H2O2干预3h造成氧化损伤模型,然后分别用含25%空白对照组、淫羊藿组、菟丝子组、肉苁蓉组、司来吉兰组大鼠血清配成的培养液培养24h。2.指标检测：(1)神经细胞形态学观察：光镜及电镜下观察各组MES23.5多巴胺能神经细胞的形态学变化。(2)凋亡因子的检测：流式细胞术检测各组MES23.5多巴胺能神经细胞Fasl、Fas、Bcl-2、Caspase-3的含量。(3)神经营养因子的检测：酶联免疫法检测各组MES23.5多巴胺能神经细胞NGF、BDNF、GDNF的含量。研究结果：1.各组MES23.5神经细胞形态观察：(1)光镜形态空白组MES23.5神经细胞,胞膜边界清晰,光滑,胞体呈梭形、圆形或不规则形,胞体饱满。模型组MES23.5神经细胞胞体变圆,体积缩小,胞质透亮度增加,可见环形透亮区,边界不清,细胞出现漂浮脱壁现象。淫羊藿组、菟丝子组、肉苁蓉组、司来吉兰组MES23.5神经细胞仍可见少量细胞漂浮脱壁现象,大部分神经元保持正常形态,细胞排列规则,其形态与空白组接近。(2)电镜形态空白对照组MES23.5神经细胞大多近圆形或椭圆形,细胞膜未见破裂或肿胀,表面微绒毛数量不等,核居中或偏位,椭圆形,细胞质内的细胞器形态及结构较完整。模型对照组MES23.5神经细胞表面微绒毛少许；线粒体空泡样较多,嵴部分断裂或消失；粗面内质网囊泡化或脱颗粒。淫羊藿组、肉苁蓉组MES23.5表面微绒毛不等,线粒体基本正常,粗面内质网较多,未见水肿,未见脱颗粒。菟丝子组MES23.5神经细胞表面微绒毛少许,偶见伪足样突起；线粒体空泡样较多,嵴部分断裂或消失；粗面内质网囊泡话或脱颗粒。司来吉兰组MES23.5神经细胞大多近圆形或椭圆形,细胞膜未见破裂或肿胀,表面可见一定数量微绒毛及突起,线粒体基本正常,粗面内质网较多,未见水肿,未见脱颗粒。2.各组MES23.5神经细胞凋亡因子表达情况：模型对照组FasL的含量明显高于空白对照组(P<0.05),肉苁蓉组、司来吉兰组FasL的含量明显低于模型对照组(P<0.05)Fas的含量无明显统计学差异；模型对照组Caspase-3的含量明显高于空白对照组,淫羊藿组、肉苁蓉组、司来吉兰组Caspase-3的含量明显低于模型对照组(P<0.05)；模型对照组Bcl-2的含量明显低于空白对照组,肉苁蓉组Bcl-2的含量明显高于模型对照组(P<0.05)。3.各组MES23.5神经细胞神经营养因子的表达情况：模型对照组NGF含量明显低于空白对照组(P<0.05),肉苁蓉组NGF含量明显高于模型对照组和司来吉兰组(P<0.05)；模型对照组的BDNF明显低于空白对照组(P<0.05),菟丝子组、肉苁蓉组BDNF含量明显高于模型对照组和司来吉兰组(P<0.05),淫羊藿组BDNF含量明显高于模型对照组(P<0.05)；肉苁蓉组GDNF含量明显高于空白对照组、模型对照组和司来吉兰组(P<0.05)；其余指标无明显差异(P>0.05)。研究结论：补肾中药淫羊藿、肉苁蓉通过调节MES23.5多巴胺能神经细胞凋亡因子及神经营养因子的表达,起到保护神经细胞的作用,可能是补肾中药延缓帕金森病情发展的可能机制之一。