【摘 要】
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目的:采用盲肠结扎穿孔（Cecum Ligation and Puncture,CLP）法建立脓毒症大鼠模型,研究Rho激酶（ROCK）抑制剂Y27632对脓毒症大鼠肠道组织紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin）表达及通透性的影响,探究Y27632对脓毒症大鼠肠道屏障功能是否起保护作用及其机制。方法:健康、成年雄性SD大鼠32只,随机分为4组（n=8）:假手术组（Sham组）,假手术+Y276
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目的:采用盲肠结扎穿孔（Cecum Ligation and Puncture,CLP）法建立脓毒症大鼠模型,研究Rho激酶（ROCK）抑制剂Y27632对脓毒症大鼠肠道组织紧密连接蛋白（ZO-1、Occludin）表达及通透性的影响,探究Y27632对脓毒症大鼠肠道屏障功能是否起保护作用及其机制。方法:健康、成年雄性SD大鼠32只,随机分为4组（n=8）:假手术组（Sham组）,假手术+Y27632组（Sham+Y27632组）,脓毒症组（Sepsis组）和脓毒症+Y27632组（Sepsis+Y27632组）。采用CLP法建立脓毒症大鼠模型,Sham组和Sham+Y27632组仅翻动肠管,不进行结扎穿孔;Sham+Y27632组和Sepsis+Y27632组于造模前15min腹腔注射Y27632溶液5mg/kg;Sham组和Sepsis组在相同时间点腹腔注射等量PBS溶液。造模24h后,安乐死大鼠。苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠小肠组织病理学变化并进行小肠黏膜损伤评分（Chiu’s评分）;透射电子显微镜（TEM）观察肠上皮细胞超微结构;酶联免疫吸附（ELISA）法检测肠道通透性指标血清D-乳酸（D-Lac）含量;免疫组化法（IHC）测定小肠组织ROCK1、磷酸化MLC（p-MLC）和紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达水平。结果:（1）光镜下Sham组和Sham+Y27632组小肠绒毛结构正常,排列规则,无充血及断裂现象;Sepsis组小肠绒毛排列紊乱,部分绒毛断裂、脱落,黏膜血管出血;Sepsis+Y27632组小肠组织病理损伤明显减轻,小肠绒毛排列尚规则,连续性较完整。小肠黏膜损伤评分显示:与Sham组相比,Sepsis组大鼠Chiu’s评分显著升高（P＜0.001）;与Sepsis组相比,Sepsis+Y27632组大鼠Chiu’s评分显著降低（P＜0.001）。（2）TEM下Sham组和Sham+Y27632组肠上皮细胞间TJ结构清晰,细胞间隙无明显增宽;Sepsis组肠上皮细胞间电子致密物质减少,表明TJ结构受损;与Sepsis组相比,Sepsis+Y27632组TJ结构损伤减轻。（3）与Sham组相比,Sepsis组和Sepsis+Y27632组大鼠血清D-Lac含量显著增加（P＜0.001）;与Sepsis组相比,Sepsis+Y27632组大鼠血清D-Lac含量显著减少（P＜0.001）。（4）与Sham组相比,Sepsis组大鼠肠组织ROCK1和p-MLC的蛋白表达显著上调,ZO-1和Occludin的蛋白表达显著下调（P＜0.001）;与Sepsis组相比,Sepsis+Y27632组大鼠肠组织ROCK1和p-MLC的蛋白表达显著下调,而ZO-1和Occludin的蛋白表达显著上调（P＜0.001）。Sham组和Sham+Y27632组以上各项检测结果差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:Y27632可以改善脓毒症大鼠肠屏障功能障碍,其机理可能是通过抑制ROCK1/MLC信号通路,上调肠道紧密连接蛋白表达,降低了肠道通透性。
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