目的：研究脑神康胶囊对糖尿病大鼠记忆能力及海马乏氧诱导因子(HIF-la)表达的影响。方法：1.糖尿病大鼠模型制备36只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和中药治疗组,糖尿病组和中药治疗组造模之前用高蛋氨酸高胆固醇饲料饲喂2周。造模前所有大鼠禁食不禁水16h,将糖尿病组和中药治疗组大鼠按60mg／kg剂量单次腹腔注射1%STZ溶液,72h后尾静脉采血测血糖,非空腹血糖值>16.67mmol/L者为造模成功。正常对照组大鼠单次腹腔注射等剂量缓冲液,其余操作同其他两组。中药治疗组用脑神康胶囊水溶液灌胃,其余两组用等量生理盐水灌胃,每日1次,持续12周。2.一般状态观察观察各组大鼠每天的饮食量、一般状况、精神状态、大小便量等,记录大鼠在0、4、8、12周的体重变化。3.BAEP实验实验前把动物麻醉,皮下针刺定点感应,记录电极放于两耳连线中点处皮下,参考电极放于同侧乳突后方皮下,地极固定于尾部。单耳给声80HZ声波刺激,波形叠加1000次,左右耳分别测试、记录,以绝对值(ms)表示。在0、4、8、12周各进行1次,记录Ⅱ波、Ⅴ波PL及Ⅲ-Ⅴ IPL值。4.Morris水迷宫实验实验第一部分是学习的过程。将迷宫水池均分为4个象限,每个象限设1个标志点,把平台设定在某一象限。实验时将动物从既定入水点面向池壁放入水池,游泳时限设为60s,超过60s未找到平台者由实验员将其引导至平台上,动物找到平台后停留15s以加强对空间位置的记忆。此部分共进行5天,每天4次。第二部分是测试记忆能力的过程。在第6天时把平台撤除,将动物在训练位置面向池壁放入水池,记录动物的游行轨迹、找到平台的时间(潜伏期)及错误次数。在0、4、8、12周各进行1次,由非操作实验的实验员分析潜伏期数据。5.血糖值所有大鼠在0、4、8、12周尾静脉采血测量血糖值。6.HE染色切片脱蜡后,在苏木素中染核3min后1%盐酸酒精分化3s,返蓝2min,然后在伊红中染胞质2min,流水冲2min,梯度酒精脱水后封片。光学显微镜下观察海马神经元形态。7.免疫组化实验切片脱蜡后行抗原修复、3%H202及5%山羊血清封闭、加一抗后4℃过夜。次日加二抗、辣根酶标记、DAB显色、苏木素染核后梯度酒精脱水,封片。采用Kodak图像分析系统及Image-ProPlus软件测定其IOD值。8.RT-PCR实验按Trizol说明书提取海马组织RNA,用分光光度计测量RNA浓度,D260/280的值均应在1.8～2.0之间。然后按TaKaRa反转录试剂盒中步骤将RNA反转录为cDNA, SYBR嵌合荧光,以β-actin为内参,HIF-1a为目的基因,Quantity one软件测定HIF-1α/p-actin的相对表达量。使用琼脂糖凝胶电泳检测PCR反应产物的特异性。结果：1.一般状态实验过程中糖尿病组大鼠出现多饮、多食、多尿,体重增长缓慢,毛色黯淡无光,嗜睡,尿液及粪便异臭味儿重等现象。中药治疗组大鼠体重逐渐增加,实验后期增重较快,饮食、进水及尿量明显少于糖尿病组大鼠,接近正常大鼠。正常对照组大鼠饮水进食适中,体重随周龄增长,活动状态正常。2.BAEP结果第4、8、12周糖尿病组较正常对照组、中药治疗组Ⅱ波PL延长(P<0.05或P<0.01)。第4、8、12周糖尿病组较正常对照组Ⅴ波PL延长(P<0.01),第8、12周,中药治疗组较糖尿病组V波PL显著缩短(P<0.05或P<0.01)。第8、12周,糖尿病组较正常对照组、中药治疗组Ⅲ-Ⅴ IPL延长(P<0.05或P<0.01)。3.水迷宫实验结果第4、8、12周,糖尿病组较正常对照组潜伏期延长(P<0.05或P<0.01)；中药治疗组较糖尿病组潜伏期缩短(P<0.05或P<0.01),较正常对照组延长(P>0.05)。4.血糖值糖尿病组及中药治疗组大鼠12周内持续高血糖。从第4周开始出现中药治疗组血糖值低于糖尿病组,第8、12周,中药治疗组较糖尿病组血糖值显著降低(P<0.05或P<0.01)。5.HE染色结果正常大鼠海马神经元细胞排列有序、轮廓清晰、结构清楚,细胞浆淡染、颜色均匀,核仁清晰,核膜完整。糖尿病组大鼠海马神经元细胞层次差、排列混乱,正常形态的细胞中夹杂有大量异常细胞,这些异常细胞胞浆深染、胞体肿胀变形、核仁消失或体积增大。中药治疗组大鼠明显好于糖尿病组,镜下可见细胞排列较为整齐有序,形态和数量均接近正常,仅有少量神经细胞胞核深染或形态异常。6.免疫组化结果免疫组化图片中棕黄色颗粒为HIF-1α表达阳性,使用IPP软件测其IOD值,并比较各组HIF-1α表达情况。第4周中药治疗组和糖尿病组HIF-1α表达量高于正常对照组(P<0.05或P<0.01)。第8、12周中药治疗组HIF-1α表达量较糖尿病组少(P<0.05或P<0.01),较正常组高(P>0.05)；糖尿病组较正常组表达量高(P<0.01)。7.RT-PCR结果以正常对照组为基础值1。第4周始糖尿病组较正常对照组HIF-1α mRNA的表达量高(P<0.01)。第4周中药治疗组较正常对照组表达量高(P<0.05),第8、12周中药治疗组较糖尿病组表达量低(P<0.05或P<0.01)。结论：脑神康胶囊能降低糖尿病大鼠血糖,改善海马组织乏氧状态,降低HIF-1α的表达,减少海马神经元损伤凋亡,实现了对糖尿病并发症记忆能力降低的有效防治。