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目的:在细胞和分子水平观察鹿茸多肽对骨髓间质干细胞（MSCs）体外分化软骨细胞生物学行为的影响,以优化软骨组织工程的种子细胞,改善软骨的修复质量,并对鹿茸多肽的作用机制进行初步探讨。方法:1.抽取兔骨髓液经密度梯度离心得到的单个核细胞,经体外分离、培养获得兔MSCs。2.采用相差显微镜观察其生长情况,透射电镜观察细胞结构,流式细胞仪检测细胞表面抗原,MTT比色法描绘生长曲线。3.将获得的兔MSCs分成不同药物浓度组并进行药物干预,48h后采用MTT比色、免疫细胞化学、流式细胞仪分析细胞周期等方法,观察鹿茸多肽对MSCs增殖的影响。4.将第3代兔MSCs分为空白对照组、诱导组及鹿茸多肽组,采用原培养液、诱导培养液及含10ug/ml鹿茸多肽的诱导培养液于离心管内进行培养,分别于1、2、3w后取材,通过组织学、生物化学和RT-PCR技术,对离心管内构建的软骨组织进行形态学和细胞功能状态的研究。5.将软骨表型化兔MSCs分为空白对照组、诱导组及鹿茸多肽组,用IL-1β诱导细胞凋亡,并用鹿茸多肽干预。分别于24h、48h、72h后取样。采用透射电镜观察细胞形态,Annexin V法检测细胞凋亡率,RT-PCR分析CasPase-3mRNA表达水平,ELISA检测CasPase-3蛋白酶活性。结果1.原代兔MSCs成均匀分布的簇状生长、形态梭形。在传代培养中形态特性无明显变化、均质性提高。细胞功能活跃,体积大,有大量扩张粗面内质网、高尔基复合体及线粒体。CD34、CD45表达阴性,CD29、CD90表达阳性,证实这些细胞是非造血干细胞。细胞1-3d增殖缓慢,3-5d快速增殖,5-7d趋于平缓,7-9d呈下降趋势。2.10ug/ml鹿茸多肽获得最佳促进MSCs增值效应,且能逆转MSCs在体外连续培养过程中异倍体的产生;在软骨诱导培养条件下其能促进GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达;鹿茸多肽能减少CasPase-3mRNA表达,抑制其蛋白酶活性,降低细胞凋亡率。结论:1.通过体外对MSCs的分离培养与鉴定,可以建立较完善的MSCs培养体系。2.鹿茸多肽在促进MSCs增殖的同时可以减少其异行性的产生,并对MSCs定向软骨分化有明显促进作用。3.CasPase-3参与细胞凋亡,鹿茸多肽通过抑制