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目的:检测乏氧情况下骨肉瘤细胞株Saos2对ADM和DDP的敏感性改变,分析其与多药耐药相关基因MDR1、GST-π、LRP(肺耐药蛋白)和MRP(多药耐药相关蛋白)表达的关系,同时检测其细胞周期的改变,探讨骨肉瘤化疗耐药的机理,为临床上预测肿瘤耐药程度、判断疗效和合理选择化疗方案提供依据和指导。
方法:乏氧条件下(0.2%O2)人骨肉瘤细胞株Saos2体外培养24小时,75%酒精固定后应用MTT法测定细胞株化疗药物敏感性;应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)检测MDR1mRNA和GST-πmRNA表达水平;MDR1、GST-π、LRP和MRP蛋白水平的表达及细胞周期的改变采用流式细胞术(FCM)进行。
结果:乏氧后Saos2细胞对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)的敏感性均低于常氧对照,耐药相关基因的表达高于常氧对照,其GST-π表达较常氧对照增加15%。细胞株经1/5半数抑制浓度(IC50)的ADM和DDP处理后,乏氧组和常氧组耐药相关基因表达均有所上调,其中GST-π增幅达30%~40%。
FCM检测肿瘤组织P-gp、LRP、MRP的表达处于较低水平,GST-π表达处于较高水平。X2分析显示,P-gp表达水平与ADM的耐药有关(X2=9.554,P=0.008),GST-π表达水平与ADM、DDP的耐药有关(X2分别为6.051、8.015,P值分别为0.049、0.013)。
患者耐药基因GST-π表达在mRNA水平较乏氧前明显升高,而MDR1无明显改变。
细胞周期的变化:缺氧组的G0/G1期比例下降,S期明显延长,G2/M显著下降,细胞阻滞于G2/M期。
结论:乏氧可引起骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性降低,耐药相关基因的表达升高。化疗可引起GST-π表达上调。原发性GST-π高表达是骨软组织肿瘤耐药的主要机制。MDR1基因未显示是骨软组织肿瘤主要的耐药机制。乏氧可导致骨肉瘤细胞的细胞周期改变,以细胞周期中的S期和G2/M期改变为主,细胞阻滞于G2/M期。