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柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,简称HLB)是世界柑橘生产的最具毁灭性病害之一,在中国已存在一百多年历史,严重制约了我国南方柑橘产业的健康发展。由于该病菌目前尚未成功培养和没有有效的防治药剂等诸多因素,严重限制了黄龙病的研究进展。黄龙病菌的多样性研究对深入了解该病菌的种群变异、分析该病害的流行学特征及提出黄龙病的防治策略具有重要的指导意义。 本论文根据黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)全基因组上CLIBASIA_01645位点存在数目可变的短串联重复序列(Short tandem repeat,STR)而设计的引物(LapGP-1f/LapGP-1r),扩增获得中国来自南方八省(广东、云南、海南、广西、江西,贵州、浙江和福建)采集的226个(柑橘和木虱)染病样品的串联重复数目(Tandem repeat numbers,TRNs),分析我国南方“Ca.L.asiaticus”种群变异及其流行学特征。 主要研究结果如下: 1.引物(LapGP-1f/LapGP-1r)对226个样品的扩增产物大小为500-750bp。其中177(占79.3%)个样品(164个为柑橘样品)扩增得到仅与“Ca.L.asiaticus”基因序列(CP001677.5)相关(相似率为92~100%)的单一电泳条带。这些条带的TRNs数目显示出从2~24连续的变化。 2.对单一电泳条带样品的TRNs检出率统计分析发现:177个样品的TRN数目多为6、7和8(分别占17.5%、21.5%和22.0%):其中广东地区93个样品的TRN也多为6、7和8(分别占22.6%、25.8%和35.5%);而广东外地区84个样品的TRN则为6、7和11(分别占14.3%、7.926和10.7%)。TRNs<10的“Ca.L。asiaticus”种群在广东地区占93.6%,而在广东外地区占60.8%。结合不同地区黄龙病爆发时间的先后以及引种记录推测广东省的“Ca.L.asiaticus”种群经过较长时间的自然选择而趋向稳定,而云南和海南的“Ca.L.asiaticus”种群可能来源于广东,并且发生一定水平的遗传变异。 3.利用X2测验“Ca.L.asiaticus”种群的地区性差异表明:广东与其余省份的“Ca。L.asiaticus”种群呈极显著差异(P<0.001);广东惠州果园与海南澄迈果园“Ca。L.asiaticus”种群相互间的差异达到极显著水平(P<0.001),与云南瑞丽果园“Ca.L.asiaticus”种群相互间的差异达显著水平(P=0.019),而广东惠州果园的柑橘和木虱样品中“Ca.L.asiaticus”种群没有差异(P=0.262)。 4.在226个样品中,49个样品(32个为柑橘样品)的PCR扩增产物为多条带,部分条带与CP001677.5的序列不同源。多电泳条带现象很可能由于不同“Ca.L。asiaticus”菌株共存于单个样品中,或者单个菌株存在复等位基因或发生了遗传变异。