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本试验比较了不同来源的酶（A型魏氏梭菌培养滤液、粗提卵磷酯酶（PLC），Ⅰ型磷酯酶C（PLC1），神经氨酸酶），不同浓度和血清型的IBV毒株，不同保存温度和时间的含毒尿囊液等因素对制备IBV HI抗原的影响。根据制备抗原的最佳条件，选用蛋白含量为2.798mg/ml的粗提PLC与等体积的M41或Y毒株的新鲜尿囊液混合，在37℃水浴作用2小时并不断振荡来制备IBV HI抗原。在HI试验中，该抗原不与AIV H5，AIV H9，NDV，EDS-76，IBD单因子血清和SPF鸡血清，小牛血清、兔血清反应，仅与IBV阳性血清反应，有高度的特异性。上述抗原可在4℃下保存3个月，与商品化的PLC1一样可制备用于HI试验的抗原用，但来源容易、价格低廉。 本文研究了影响IBV HI试验的各因素，选用0.5％的红细胞浓度，PH7.4 0.01M PBS的稀释液，抗原抗体在室温30分钟，加红细胞后置4℃50分钟判读结果等条件，建立了监测IBV抗体的HI试验。该试验有很高的特异性、重复性。通过对25份非免疫鸡血清抗体的测定与攻毒试验，确定了免疫临界线为41og2，HI滴度＞41og2，相当于ELISA P/N值大于2.1中和效价大于1：20，攻毒保护5/5’、HI滴度≤41og2,相当于ELISA P/N值小于2.1，中和效价小于1：20，攻毒保护3/9，HI试验与中和试验，ELISA试验有很高的相关性。为了减少各种因素的影响，提高不同测试条件下结果的可比性，HI试验中采用了阳性参照血清，该血清特异性、重复性好，可在-20℃下保存5 个月效价不变。 用建立的HI试验进行了IBV的分型研究，通过与6株m 单抗 的交叉W试验，可将15个毒株分为3大群：①与人单抗反应，与 C。单抗不反应的有7株，标准株有M。；、H；。卜H；。，地方分离株有江 苏Y、红、14＼9801；②与C。单抗反应，与人单抗不反应的有3株： ＊、张1＊V、A二：③与两者有弱反应，或均不反应的有S株：标准 株有 Ark、C，地方毒株有 E、9807、118。通过与 15个不同毒株单 因子血清的交叉m试验，表明不同毒株间有广泛交叉，也可将15个 毒株分为三大群，①与M。；相关系数70以上，与Y相关系数20以下 的划为一群，有标准株M。；、H；扣、H订，地万株有江苏Y、红、14＼ 9801、张m：②与Y毒株相关系数大于70，与M41相关系数小20 的划为一群，有Y、9807、Am；③与两者相关系数均为中度相关的 划为一群，有 C、E、118、AIk。两种分型大致相同，表明由于基因 重组和点突变，我国IBV血清型众多，但M类呼吸型占主要地位 门0％人Y毒株类也占一定比例30％人因此可选用M41＋Y或M41＋ 当地毒株来制备 IB疫苗。IBV H［试验具有型特异性，初次免疫应用 疫苗株同型毒株做抗原，再次免疫交叉增大，可采用混合毒株做抗原。 用m试验进行IB的血清流行病学调查，7群不同日龄的鸡兔疫前 M抗体滴度均为 2—41Og。，免后 20天 M滴度均为 7一11 IOgZ，上升“了 3一7log卜 出壳雏鸡母源抗体在 5刁 天后降至临界值 4log。水平。 25日龄初免鸡，IB抗体在免后 ZI天达到峰值 6log。，维持一个月后降 至临界值 4logZ：70日龄进行二免的青年鸡，IB抗体 ZI天后升至峰 ．2－ 值 10log。，至实验结束时维持 3个月无明显下降；成年鸡随鸡龄的增 大而抗体滴度升高，维持时间则更长，符合免疫学反应规律。实践表 明用自制 IBV W抗原建立的m试验简便／快速、准确，可为基层提 供一种用于IBV的诊断，免疫效果检测和血清流行病学调查研究的 新方法。本研究还可为IBV分型、疫苗株的选择、免疫程序的制订 及防制措施的建立提供实践上、理论上的参考意义。