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目的研究热应激AA肉仔鸡下丘脑五个采食量调节因子之间的相互关系以及采食量与调控基因之间的相互关系,研究确定酸枣仁皂苷提高热应激肉仔鸡采食量的下丘脑作用机制,为鸡的热应激调节提供理论基础。研究常温饲养条件下和热应激饲养处理下肉鸡下丘脑NPY、MC4R、GABAA-α1受体、POMC、AgRP在下丘脑的表达,探索酸枣仁皂苷改善热应激肉仔鸡采食量的下丘脑作用机制,为合理利用酸枣仁皂苷抗肉鸡热应激奠定理论基础,丰富鸡的采食量调控理论。方法实验样本通过饲养试验获得。饲养试验采用完全随机设计。4周龄设对照组和饲粮添加1.0mg/kg酸枣仁皂苷组。6周龄设常温对照组、34℃热应激处理组。热应激处理组分热应激对照组、热应激前添加酸枣仁皂苷组、热应激期间添加酸枣仁皂苷组和热应激前后添加酸枣仁皂苷组。从商品AA肉鸡孵化场购入1日龄AA商品肉鸡,鉴别雌雄。饲养至2周龄,按平均体重剔除体重过大或过小的鸡,雌雄雏鸡分别随机留375羽,随机分5组,每组分3个重复,按栏称重。28日龄,每个重复随机取5羽,屠宰取样。29日龄,在20min内将热应激处理鸡舍温度提升至34℃,并维持在34℃±1℃。每周末计量每栏采食量和体重。43日龄,每个重复随机选取5只,用于屠宰取样。通过合成AgRP、GABAA-α1受体、MC4R、POMC多肽,制备多克隆抗体。采用免疫组化的方法检测肉鸡下丘脑NPY、AgRP、GABAA-α1受体、MC4R、POMC的表达,利用IPP6.0图像分析软件分析图像,SPSS软件分析数据结果。结果1.4周龄肉鸡饲粮添加酸枣仁皂苷,对下丘脑NPY、 MC4R、GABAA-α1受体、 POMC无显著影响(P>0.05);极显著降低了公鸡下丘脑AgRP表达量(P<0.05)。2.6周龄热应激处理,对公母鸡下丘脑NPY表达无显著影响(P>0.05),母鸡下丘脑MC4R、公母鸡GABAA-α1受体、公鸡下丘脑POMC表达有升高趋势,差异不显著(P>0.05);母鸡下丘脑POMC表达、公鸡下丘脑AgRP表达极显著降低(P<0.01)。3.热应激肉鸡饲粮添加酸枣仁皂苷,各处理组下丘脑NPY表达差异不显著(P>0.05)。与热应激对照组相比,公鸡热应激期间饲粮添加酸枣仁皂苷,显著降低了下丘脑MC4R表达(P<0.05),母鸡热应激期间、热应激前和热应激期间饲粮添加酸枣仁皂苷,极显著降低了下丘脑MC4R表达(P<0.01)。与母鸡热应激对照相比,热应激前和热应激期间饲粮添加酸枣仁皂苷,极显著提高了母鸡下丘脑GABAA-α1受体表达(P<0.01)。与热应激公鸡相比,热应激期间饲粮添加酸枣仁皂苷,显著提高了公鸡下丘脑POMC表达(P<0.05);与热应激母鸡对照相比,热应激前、热应激期间饲粮添加酸枣仁皂苷,分别极显著和显著提高了母鸡下丘脑POMC表达(P<0.01,P<0.05)。与热应激公鸡对照相比,热应激前和热应激期间饲粮添加酸枣仁皂苷,极显著提高了公鸡下丘脑AgRP表达(P<0.01);与母鸡热应激对照组相比,饲粮添加酸枣仁皂苷组均显著或极显著提高了母鸡下丘脑AgRP表达。多因素方差分析表明,性别极显著影响6周龄肉鸡下丘脑MC4R表达(P<0.01);饲粮添加酸枣仁皂苷,极显著影响肉鸡下丘脑POMC、MC4R、AgRP表达(P<0.01);性别和温度互作,显著影响下丘脑AgRP表达(P<0.05),极显著影响下丘脑POMC表达(P<0.05);性别和酸枣仁皂苷互作,极显著影响下丘脑POMC表达(P<0.05),显著影响下丘脑MC4R表达(P<0.05)。4.热应激处理和饲粮添加酸枣仁皂苷,改变了下丘脑采食量相关基因表达量之间的相互关系。相关分析表明,POMC与AgRP负相关(r=-0.962,P<0.05),NPY与AgRP负相关(r=-0.715—-0.970,P<0.05),MC4R与AgRP正相关(r=0.990—0.999,P<0.05),POMC与NPY正相关(r=0.999,P<0.05),POMC与MC4R负相关(r=-0.744—-0.999,P<0.05),POMC与GABAA-α1负相关(r=-0.965,P<0.05),NPY与MC4R负相关(r=-0.985—-1.000, P<0.05), GABAA-α1与MC4R正相关(r=0.951, P<0.05)。5.肉鸡采食量与下丘脑MC4R表达负相关(r=-0.568,P<0.05)。用下丘脑MC4R表达与采食量之间的数学模型为e^(4.657294+0.025591x)(g/d per bird)。结论1.本实验通过合成多肽,免疫新西兰大白兔,经血清分离和纯化,成功制备了MC4R、GABAA-α1、POMC、AgRP多肽抗体。2.热应激对肉鸡下丘脑NPY、 GABAA-α1的表达量无显著影响,而显著提高了母鸡下丘脑的MC4R,公鸡和母鸡的POMC,显著降低了公鸡的AgRP下丘脑表达量。MC4R、POMC、AgRP可能是肉鸡直接调控采食量的基因。3.4周龄常温饲养肉鸡饲粮中添加酸枣仁皂苷,对下丘脑NPY、MC4R、 POMC表达无显著影响,显著提高了母鸡下丘脑GABAA-α1、极显著降低了公鸡下丘脑AgRP表达,可能是酸枣仁皂苷提高采食量的作用机制。4.6周龄热应激肉鸡饲粮中添加酸枣仁皂苷,显著降低了公母鸡下丘脑MC4R、提高母鸡的GABAA-α1、母鸡POMC、公母鸡的AgRP表达量;性别*酸枣仁皂苷对肉鸡下丘脑POMC、MC4R表达量有显著的互作关系,提示酸枣仁皂苷可能是通过调控肉鸡下丘脑MC4R、GABAA-α1、POMC、AgRP表达量发挥改善热应激状态下肉鸡生产性能的作用;对公母鸡的调控作用有差异。5.肉鸡的采食量与下丘脑MC4R表达量显著负相关,建立的相关数学模型。