论文部分内容阅读
目的：观察侧脑室注射氯通道阻断剂4,4’-二异硫氰基芪-2,2’-二磺酸（4,4’-diisothiocyanostibibene-2,2’-disulfonic acid, DIDS）对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元凋亡和死亡和对Caspase-3和Bcl-2等分子的影响,探讨氯通道阻断剂DIDS对脑缺血损伤的保护效应和在缺血性脑损伤中氯离子通道对神经元凋亡的作用。 方法：健康成年雄性SD大鼠72只,体重230±10g,随机分为正常组（Control）24只、模型+侧脑室注射生理盐水对照组（I/R）24只、模型+侧脑室注射DIDS组（I/R+DIDS）24只,模型是利用Longa线栓法制备的大鼠脑缺血再灌注模型,模型+侧脑室注射DIDS组在模型制成后立即给予侧脑室注射5μlDIDS （100μmol/L）溶液,模型+对照组在模型制备后立即注射5μl生理盐水。利用TTC染色观察大鼠大脑缺血的梗死面积变化和HE染色观察海马CA1区组织结构破坏及细胞死亡,TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡情况。通过免疫组化和Western-blot观察海马神经元Caspase-3和Bcl-2的变化。 结果：（1）TTC染色检测发现,正常组的梗死面积为0,模型+侧脑室注射生理盐水组的切面梗死面积与全脑切片面积的比值为0.109±0.005,模型+侧脑室注射DIDS组的切面梗死面积与全脑切面的比值为0.036±0.007。模型+侧脑室注射DIDS与模型+侧脑室注射生理盐水组相比梗死面积明显减少,有显著的差异性（p＜0.05）。 （2）HE染色检测发现,正常组的海马CA1的神经元胞体完整,排列整齐,胞浆丰富,未见水肿及核固缩,模型+侧脑室注射生理盐水组海马CA1区的神经元排列紊乱,组织水肿,可见核固缩及神经元死亡,模型+侧脑室注射DIDS组比模型+侧脑室注射生理盐水组海马CA1区神经元排列更整齐,组织水肿更轻微,核固缩及神经元死亡更少。 （3） TUNEL检测发现,显微镜×200倍镜下,正常组海马CA1区的神经元很少凋亡细胞,模型+侧脑室注射生理盐水组的同一切片中的五个海马CA1区视野的神经元的凋亡数目为65±4,模型+侧脑室注射DIDS组的同一切片中的五个海马CA1区视野的神经元的凋亡数目为32±6,模型+侧脑室注射DIDS与模型+侧脑室注射生理盐水组相比海马CA1区的神经元凋亡的数目明显减少,有显著差异（p＜0.05）。 （4）免疫组织化学检测发现,显微镜×200倍镜下,正常组海马CA1很少带有Caspase-3蛋白和Bcl-2蛋白深染颗粒的神经元,模型+侧脑室注射生理盐水组的同一切片中的五个海马CA1区视野带有Caspase-3蛋白和Bcl-2蛋白深染颗粒的神经元分别为117±7和86±9,模型+侧脑室注射DIDS组的同一切片中的五个海马CA1区视野带有Caspase-3蛋白和Bcl-2蛋白深染颗粒的神经元分别为70±9和129±6。模型+侧脑室注射DIDS与模型+侧脑室注射生理盐水组相比海马CA1区带有Caspase-3蛋白深染颗粒的神经元明显减少,有显著差异性（p＜0.05）。模型+侧脑室注射DIDS与模型+侧脑室注射生理盐水组相比海马CA1区带有Bcl-2蛋白深染颗粒的神经元明显增多,有显著差异性（p＜0.05）。 （5） Western-bloting检测Caspase-3蛋白,发现正常组的灰度值为0.010±0.005,模型+侧脑室注射生理盐水组的灰度值为0.971±0.012,模型+侧脑室注射DIDS组的灰度值为0.712±0.023,模型+侧脑室注射DIDS与模型+侧脑室注射生理盐水组相比Caspase-3蛋白的表达明显减少,有显著差异性（p＜0.05）。Western-bloting检测Bcl-2蛋白,发现正常组的灰度值为0.012±0.005,模型+侧脑室注射生理盐水组的灰度值为0.974±0.028,模型+侧脑室注射DIDS组的灰度值为1.752±0.021,模型+侧脑室注射DIDS与模型+侧脑室注射生理盐水组相比Bcl-2蛋白的表达明显增加,有显著差异性（p＜0.05）。 结论：1.DIDS可以减少大鼠大脑缺血再灌注的梗死面积。 2. DIDS可以减少大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的凋亡与坏死,从而减少神经元的死亡。 3.在大鼠脑缺血再灌注损伤时,DIDS可以下调Caspase-3的表达和上调Bcl-2的表达。 4.氯离子通道可能参与了缺血再灌注神经元的凋亡。