基于常温链置换放大作用的表面增强拉曼传感器检测端粒酶

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肿瘤细胞是由基因表达失控引起的正常细胞异常繁殖形成的。最近研究发现,端粒的不断缩短、融合或缺失对肿瘤细胞的无限增殖起着重要作用。端粒酶却能以自身为模板,不断合成.TTAGGG-序列,维持端粒的长度,防止其缩短或丢失。这样,就使细胞形成无限增殖的永生细胞也就是肿瘤细胞。Hastie等人研究表明,端粒序列缩短是肿瘤发生的重要标志。因此,对端粒和端粒酶的研究就显得非常迫切和重要。生物传感器可以检测端粒酶的存在、活性及浓度,为临床科学、生物科学以及化学科研做出巨大贡献。本论文主要研究了简单并且灵敏的拉曼传感器,其基于磁性微球、金纳米粒子的放大作用对端粒酶进行检测,并通过银对拉曼信号的增强进一步降低了检测限。这以下是论文包含的内容:1.基于磁珠和金纳米粒子的放大作用制成生物传感器检测端粒酶浓度。发卡DNA与磁性微球相接,适体1与颈环部分配对,并通过端粒酶的不断复制生长解开发卡结构,与适体2连接的金纳米粒子再与发卡DNA未碱基互补配对的部分杂交,在DNA聚合酶的作用下生长替换下适体1,而被替换下的适体1可以重复使用,最后将连接在磁性微球的发卡DNA全部打开,连接上金纳米粒子(在金纳米粒子上提前连接信号分子R6G-DNA),便可进行拉曼信号检测。检测范围2.0×10-14-2.0×10-12IU/mL,最低检测限是2.0×10-14IU/mL,体现了较好的准确性和可行性。2.探究了银对于拉曼信号的增强作用,并对金纳米粒子表面沉积一层银,制成Au@Ag核壳结构,以Au@Ag双金属纳米粒子为增强基底,对端粒酶的检测限降低了3个数量级。同时,将此拉曼传感器运用到Hela细胞中端粒酶的检测,获得了很好的效果。在第二章的基础上,向制得的金纳米粒子中依次加入1%的PVP,0.1M的L-SA,1mM的AgNO3溶液,Ag+在抗坏血酸钠的作用下被还原成Ag单质,沉积在金纳米粒子表面,用Au@Ag双金属纳米粒子制成拉曼传感器。以此方法制得的生物传感器检测成品端粒酶和Hela细胞中的端粒酶,检测范围分别是5.0×10-17-1.6×10-15IU/mL,10-400cells/mL,检测限分别是5.0×10-17IU/mL,10cells/mL。此方案还可用于复杂环境中细胞的检测,因其灵敏度高,成本低,操作简单,目前适用于大量的生物分析研究。3.本章研究了Au@Ag核壳结构对多种DNA的检测,由于多种DNA的联合检测,使得检测方法更加灵敏和准确,通过纳米金磁微粒和金纳米粒子的放大作用放大拉曼信号,同时使用Ag沉积在金纳米粒子表面以增大表面粗糙度来增大表面积,从而进一步增大了信号,对DNA的检测限是2×10--5M。
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