水杨酸应答新基因OsAAA1在水稻广谱抗病反应中的分子机理初步研究

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AAA-ATPases基因家族(ATPases associated with various cellular activities)是一类与多种细胞活动有关的ATPase类,在真核生物和原核生物中广泛存在。该基因家族蛋白具有保守的Walk A和Walk B结构域,以及特异的SRH区域。参与细胞骨架调节和表达调控、膜运输、蛋白降解、蛋白折叠等多种生理活动。有关植物中AAA-ATPase基因家族参与抗病反应的研究较少。本研究室在前期的研究中,利用基因芯片筛选得到了一个参与水稻抗病反应的AAA-ATPase基因家族新成员—OsAAA1基因,对其进行植物激素和稻瘟病菌的诱导表达分析,发现该基因受水杨酸和稻瘟病菌双诱导。OsAAA1基因超表达表现对稻瘟病和白叶枯病均具有很好的抗性,是一个潜在具有广谱抗性的新基因资源,该基因抗性机理的研究,对阐明广谱抗性机理具有很重要意义。本研究初步探究了OsAAA1基因的抗病机理,主要内容如下:(1)对OsAAA1基因在水稻不同时期不同组织以及在非生物逆境胁迫处理下的表达模式进行了分析。结果发现OsAAA1在幼苗期和分蘖期各个组织的表达量都较低,在抽穗期的表达量均较高,其中在叶和穗中的表达量最高。在非生物逆境胁迫处理下,发现OsAAA1基因在盐、温度、酸碱、重金属CdCl2等胁迫下表达量均下调,而在H2O2胁迫下表达量明显上调,表明该基因可能参与H2O2介导的信号途径。(2)对OsAAA1超表达转基因水稻表达谱基因芯片进行生物信息学分析,得到了927个基因可能是因为转入OsAAA1基因后与抗稻瘟病直接相关的基因;进行了趋势显著性分析及时间序列的共表达网络分析,得到6个参与抗性反应的关键基因,并利用qRT-PCR对这6个基因的表达量进行了验证。GO注释分析表明,这6个基因均参与逆境胁迫、细胞的代谢过程、信号传导等。OsAAA1与这6个基因的相互关系还有待于进一步研究。(3)通过酵母双杂技术成功筛选得到OsAAA1的互作蛋白OsSSI2、WRKY13、WRKY68、Pib和Pit,并构建OsSSI2原核表达载体,优化表达条件,成功表达出OsSSI2的可溶性蛋白,为互作蛋白的验证奠定了基础。
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