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骨质疏松会降低口腔种植体初期稳定性和延迟骨结合,影响种植成功率。淫羊藿苷(ICA)具有骨诱导性,可促进骨、血管生成,抑制骨质吸收,治疗骨质疏松效果明确,无毒副作用。将ICA加载在钛(Ti)种植体表面,可以促进种植体周围骨组织生成,实现早期骨结合。目的:研究不同浓度ICA对MC3T3-E1成骨细胞的作用效果;在此基础上分别构建二氧化钛(TiO2)纳米管(NT)负载ICA并加盖聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)涂层和绿色环保的钛表面经相转变溶菌酶(PTL)预处理并以层层自组装方式加载ICA的涂层,对两种改性试样进行表征,研究药物释放规律,通过体外实验观察试样对MC3T3-E1成骨细胞生物活性的作用效果。通过体内实验研究TiO2纳米管负载ICA并加盖PLGA涂层在正常大鼠体内骨结合的影响;进一步探讨钛表面经PTL预处理并以层层自组装方式加载ICA涂层的钛种植体对正常大鼠和骨质疏松大鼠体内骨结合的影响。方法:1、采用含不同浓度ICA的培养基培养MC3T3-E1成骨细胞。通过倒置相差显微镜观察细胞的铺展情况;细胞计数实验(CCK-8)、碱性磷酸酶检测(ALP)、茜素红染色的方法观察细胞增殖、分化和钙化效果。2、采用两种方式对钛表面进行改性。(1)通过阳极氧化反应制备TiO2纳米管,通过浸泡吸附ICA进入纳米管内制备NT-ICA的试样,并在此基础上加盖PLGA涂层制备NT-ICA-PLGA试样。(2)在钛表面PTL的预处理层上构建由透明质酸(HA)层和负载ICA的壳聚糖(CS-ICA)层通过层层自组装形成的绿色环保的复合涂层Ti-PTL-[HA/CS(ICA)]3。3、通过SEM、XPS和接触角测定表征两种改性方法的材料学特征;采用高效液相色谱分析ICA释放规律;通过体外实验(CCK-8、ALP、AO/EB、细胞骨架染色、实时荧光定量PCR、Western blot)和体内实验(脱钙和不脱钙组织学染色)评估其体内外生物学效应。4、进一步将纯钛种植体试样及Ti-PTL-[HA/CS(ICA)]3种植体试样植入骨质疏松及假手术组的大鼠股骨内,通过脱钙软组织切片观察Ti-PTL-[HA/CS(ICA)]3组试样促进成骨的效果。结果:1、不同浓度的ICA均可促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖和分化。其中低浓度(10-7-10-9mol/L)的ICA促进增殖的效果更明显而高浓度(10-5-10-6mol/L)的ICA促进分化的效果更加明显。2、在采用TiO2纳米管负载ICA并加盖PLGA的方式制备的涂层中,扫描电镜显示NT、NT-ICA及NT-ICA-PLGA的试样表面形貌,证明涂层制备成功。接触角结果表明NT-ICA-PLGA改性后亲水性提高。药物缓释实验提示NT-ICA-PLGA涂层中ICA释放周期可达到2周。体外细胞培养显示,NT-ICA-PLGA涂层对MC3T3-E1成骨细胞无毒性,且对细胞粘附、增殖及分化有一定促进效果。体内动物实验表明,NT-ICA-PLGA组种植体周围的新生骨骨量明显增多。3、根据绿色环保的原则采用钛表面经PTL预处理并以层层自组装方式加载ICA制备的涂层中,扫描电镜及XPS证实载药层层自组装涂层的成功制备。接触角测定结果表明,构建载药层层自组装涂层后的亲水性提高。药物缓释实验提示载药层层自组装涂层中的ICA缓释周期达到2周。细胞实验显示MC3T3-E1成骨细胞在Ti-PTL-[HA/CS(ICA)]3组的试样表面表现出更好的粘附、增殖及分化效果。在正常大鼠动物实验中,脱钙的软组织切片和不脱钙的硬组织切片结果均显示,Ti-PTL-[HA/CS(ICA)]3组的试样周围较纯钛组可见更多的新骨生成。4、在大鼠骨质疏松模型中,脱钙的软组织切片结果显示,Ti-PTL-[HA/CS(ICA)]3组的种植体可以显著增强种植体周围新骨的形成量,提升种植体与骨的结合能力。结论:本研究表明,不同浓度ICA对MC3T3-E1成骨细胞的作用效果不同。通过在钛表面制备TiO2纳米管并加载ICA和PLGA涂层以及绿色环保的钛表面经PTL预处理并以层层自组装方式加载ICA两种改性方法均可以使ICA在早期成骨阶段达到缓释效果。体外实验表明,两种涂层均可以促进MC3T3-E1成骨细胞的粘附、增殖及分化。体内研究表明TiO2纳米管负载ICA并加盖PLGA涂层在正常大鼠体内具有良好的促进骨结合的能力;进一步研究发现钛表面经PTL预处理并以层层自组装方式加载ICA的绿色环保涂层的钛种植体在正常及骨质疏松动物体内具有更佳的促进骨结合的效果。