论文部分内容阅读
背景：结肠癌是胃肠道常见的恶性肿瘤,近年来在我国大城市其发病率和死亡率处于上升趋势。实验动物模型是人类肿瘤的复制,利用动物模型可以缩短研究时间,观察肿瘤发生、发展的全过程,并可在人为控制条件下进行各种实验研究,对肿瘤的发生发展机制、预防及治疗的研究有着重要意义。目的：1建立裸鼠人结肠癌动物的模型,为结肠癌的治疗研究提供可靠的模型动物。2利用裸鼠人结肠癌动物的模型肿瘤标本进行Ki67蛋白表达。方法：1试验动物和细胞BALB/c裸鼠,体质量20-25g,均为雄性,北京维通里华公司购买。人结肠癌HCT-8细胞、人结肠癌细胞株LS-174-T,人结肠癌细胞株SW620,购于中国科学院上海生命科学研究院。2试验动物的饲养BALB/c裸鼠,鼠龄4周,随机分组,每组10只,共3组,与3种癌株相对应。饲养环境恒温、恒湿、清洁、无特殊病原体,定期更换垫料,清洁饮用水及饲料供裸鼠自由摄入。3人结肠细胞的培养用含10%胎牛血清、100U/mL青、链霉素的RPMI-1640培养基,加0.2%NaHCO3调pH7.0-7.2,置于含5%C02的培养箱中37℃培养,用0.25%的胰蛋白酶消化传代。4 BALB/c裸鼠接种癌株取对数生长期肿瘤细胞以PBS液配置成细胞悬液进行接种。接种细胞浓度为1×107个/ml,每只裸鼠接种量为0.2ml。强力碘消毒裸鼠左侧胁腹,用刻度为1ml的注射器抽取配置好癌细胞0.2ml,即细胞总数为2×106/ml,注入裸鼠左侧胁腹。3种癌株分别注入与之相对应的3组裸鼠。5裸鼠生长情况接种第1周,裸鼠活动如常,饮食正常,体形无变化；2周后大部分裸鼠,肉眼便可见皮下有一约绿豆大的肿块结节,左侧胁腹隆起明显；3周后个别裸鼠身体出现消瘦,行动渐迟缓,摄食量减少。5周后裸鼠明显消瘦,行动迟缓,精神差,肿瘤增长缓慢,基本稳定在一个平台上；第7-8周荷瘤裸鼠厌食、体弱,瘤结出现破溃,中心可见坏死区域。6肿瘤生长曲线的观察接种后定期观察试验裸鼠肿瘤生长情况及其全身状况,掌握肿瘤的形成时间及生长情况,观察裸鼠一般活动及营养状态等。30只荷瘤鼠定期密切观察,接种局部触及肿瘤结节时,记录潜伏期。对出现肿瘤结节者,每两天用游标卡尺测量肿瘤的长径和短径,代入下式计算肿瘤体积：V=长径（mm）×短径2（mm2）/27解剖学和病理组织学观察待荷瘤裸鼠十分赢弱时脱颈处死,解剖动物常规取材。皮下移植瘤用10%中性甲醛固定,经脱水、透明、石蜡包埋、切片、HE染色及封片,免疫组织化学,光镜下观察、照像。结果：1动物模型成功建立,三种癌株（LS-174-T、SW620、HCT-8）的成瘤率分别为70%、80%、60%。2肿瘤生长曲线呈S型,显示了该肿瘤生长呈现4个阶段：第1阶段为潜伏期（1-7d）；第2阶段为缓慢生长期（8-14d）；第3阶段为对数生长期（15-31d）；第4阶段为生长稳定期（32-57d）,因肿瘤的生长己达到一定的体积与时限,生长速度减慢。3 HE切片结果显示组织细胞排列成不规则腺体状,有核分裂相,与大肠癌肿瘤标本相一致。4三种裸鼠人结肠癌动物模型的肿瘤标本,Ki67蛋白的表达阳性率接近,均为85%左右,与人大肠癌肿瘤标本相一致。结论：1通过癌株移植到BALB/c裸鼠能够很好的建立裸鼠人结肠癌模型,为进一步研究结肠癌奠定了基础。2三种裸鼠人结肠癌动物模型的肿瘤标本,Ki67蛋白的表达阳性率接近,均为85%左右,与人大肠癌肿瘤标本相一致。3裸鼠人结肠癌动物模型的肿瘤标本可以成为临床大肠癌肿瘤标本进行Ki67蛋白研究的替代品。