[目的]POU4F3基因突变可引起人类DFNA15非综合征型遗传性耳聋,是临床较为常见的渐进性语后聋。目前该疾病的临床病理机制仍不清楚,亦无有效的预防及靶向性疗法。本课题完全模拟首次发现的犹太裔DFNA15耳聋家系的基因突变序列构建Pou4f3变小鼠模型,明确DFNA15遗传性聋的病理组织学及分子生物学发病机制,为该种疾病的防治及临床药物疗法奠定实验研究基础。[方法]利用转基因敲入技术构建Pou4f3二个外显子末端8个碱基对缺失的突变小鼠,对纯化背景后经基因型鉴定明确三种基因型小鼠(纯合突变型Pou4f3△/△、杂合突变型Pou4f3△/+及野生型对照Pou4f3/+)进行了一般外观及行为学观察、听功能及前庭功能检测、内耳组织病理学分析、下游靶基因的检测及应用突变后正调控的靶基因拮抗剂药物进行治疗研究。在前期对5周至17月龄小鼠行听功能检测的基础上又主要分析了 I波幅值的变化并且将突变小鼠听功能随年龄变化趋势同临床资料进行比较;完善小鼠的内耳组织学病理表型分析。应用免疫荧光及免疫印迹方法完善内耳组织下游基因的蛋白水平检测。同时依据其分子致病机制,进行了靶向性药物的动物实验研究,分析给药前后的听功能及内耳组织分子生物学变化。[结果]将小鼠ABR阈值与DFNA15犹太裔H耳聋家系患者临床资料对比,结果显示:Pou4f3△/+小鼠随着年龄增长,ABR阈值呈进行性缓慢增长,与耳聋家系中患者的纯音测听阈值升高进程基本一致,该听功能检测结果反应本实验中构建的小鼠模型能够比较贴切地模拟人类DFNA15疾病。内耳组织形态学观察可见Pou4f3△/+耳蜗内毛细胞静纤毛融合、异常增生延长;外毛细胞局部缺失,纤毛束较正常变稀疏。同时透射电镜中内外毛细胞中均出现线粒体水肿、空泡化现象。我们还检测到Pou4f3△/+耳蜗Espin的表达较对照组异常增多。同时应用了 Espin的抑制剂对二乙氨基苯甲醛(DEAB)行2月龄Pou4f3△/+小鼠听力挽救实验,结果显示给予抑制剂后听功能下降减缓,耳蜗组织Espin的表达较对照给药组下降。[结论]通过听功能检测,本研究中构建的Pou4f3△/+小鼠能够作为人类DFNA15疾病的良好的动物模型,有助于对该疾病发病机制及防治疗法的深入研究。研究发现Pou4f3△/+小鼠内外毛细胞纤毛及线粒体的形态异常,从而可能影响内外毛细胞对声音处理及传输的功能,导致了渐进性的听功能下降,为DFNA15提供可能的内耳形态学病理机制。进一步研究表明由于转录因子POU4F3突变,影响下游Espin的表达,进而可能导致内毛细胞出现纤毛融合、异常增生延长,是引起听功能下降的重要成因。Espin的抑制剂对二乙氨基苯甲醛对Pou4f3△/+小鼠听功能的挽救为临床实施靶向性药物开发与研究奠定坚实的基础。同时本研究构建的Pou4f3△/+小鼠为人类DFNA15疾病筛选得到更好的靶向性治疗药物研究提供了理想的动物模型。