非洲猪瘟（African swine fever,ASF）由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的高传染性和高死亡率传染病,自然宿主为家猪和野猪。ASFV流行速度快,可在宿主体内形成持续性感染,而不表现明显的疾病症状,防控困难。ASFV基因组约为170-193 kb,包括150-167个开放阅读框（Open reading frame,ORF）,编码近200种蛋白。该病毒基因组庞大,具有复杂的免疫逃避机制,至今没有有效的疫苗。ASFV多数编码蛋白功能未知,对其研究可进一步加深我们对ASFV免疫逃避和致病机理的理解,对新疫苗的研发具有潜在意义。天然免疫Toll样受体8（Toll-like receptor 8,TLR8）属于Toll样受体家族成员,被相应的病原相关分子模式（Pathogen-associatedmolecularpatterns,PAMP）激活后,释放白介素在内的多种炎性细胞因子,介导抗细菌和抗病毒反应。鉴于ASFV结构的复杂性,包括TLR8在内的多个天然免疫识别受体,都可能参与了该病毒感染识别和免疫。本文主要围绕ASFV蛋白对TLR8信号通路的免疫抑制和作用机制展开研究。本研究通过TLR8-NF-κB稳定报告细胞系对ASFV 137个ORF在猪TLR8信号通路中的调控作用进行检测,并在其中筛选得到对TLR8-NF-κB信号抑制效应最为显著的A528R蛋白。通过双荧光素酶报告实验对A528R在TLR8-NF-κB信号通路中的作用靶点进行检测,结果显示,A528R可以抑制TLR8-NF-κB信号通路中主要信号蛋白（TLR8、MyD88、IKK-β和NF-κB p65）表达所引起的下游NF-κB信号,虽然不排除A528R在TLR8-NF-κB信号通路中具有多作用靶点的可能,但推测p65是A528R在TLR8-NF-κB信号通路中发挥抑制作用的关键靶点。确实,A528R可以抑制p65的磷酸化、细胞核转位、核定位和细胞信号活性。通过间接免疫荧光分析A528R和p65在猪肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages,PAM）中的细胞定位,发现二者之间存在明显的共定位现象。免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）结果表明A528R与p65蛋白存在相互作用关系。进一步通过构建A528R及p65的突变体,探究A528R与p65之间的相互作用位点,结果表明p65的Rel同源结构域（Rel homology domain,RHD）介导其与A528R的相互作用;A528R中的5个锚蛋白重复序列（Ankyrinrepeat,ANK）都影响其与p65的相互作用。TLR8信号通路在激活后具有显著的抗细菌和抗病毒效应。A528R会干扰R848/TLR8信号的抗细菌和抗病毒作用,而在其ANK位点突变后A528R对TLR8通路抗感染作用的抑制作用随之下降。综上所述,本研究证明了 ASFV的A528R蛋白通过其ANK位点与TLR8信号通路中的p65蛋白相互作用,抑制了 TLR8信号通路及其介导的抗病毒和抗细菌作用,在ASFV免疫逃逸中发挥了重要作用,这将为ASFV的防治及疫苗研发提供理论线索。