【摘 要】
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目的:探讨Macelignan对谷氨酸诱导的鼠性海马神经元HT22细胞凋亡的调控机制。方法:以鼠性海马神经元HT22细胞为研究对象,利用终浓度为2.5mM的谷氨酸建立神经毒性细胞模型。运用MTT法,检测不同浓度谷氨酸（0.63、1.25、2.5、5mM）和Macelignan（2.5、5、10μM）对细胞活力的影响;运用ELISA试剂盒,测定MDA、SOD的活性;倒置显微镜观察对照组、谷氨酸组和M
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目的:探讨Macelignan对谷氨酸诱导的鼠性海马神经元HT22细胞凋亡的调控机制。方法:以鼠性海马神经元HT22细胞为研究对象,利用终浓度为2.5mM的谷氨酸建立神经毒性细胞模型。运用MTT法,检测不同浓度谷氨酸（0.63、1.25、2.5、5mM）和Macelignan（2.5、5、10μM）对细胞活力的影响;运用ELISA试剂盒,测定MDA、SOD的活性;倒置显微镜观察对照组、谷氨酸组和Macelignan组（10μM）HT22细胞形态学变化;采用TUNEL染色法,检测各组HT22细胞的凋亡程度并计算阳性细胞率;运用荧光染色及其Western blotting技术,检测了Macelignan及PI3K抑制剂LY294002（10μM）对谷氨酸诱导的p-PI3K、p-AKT、FoxO3a、NF-k B、CyclinD1、Cleaved-Caspase3以及Klotho等蛋白表达水平的影响。结果:1.MTT检测表明,Macelignan能够有效抑制谷氨酸诱导的HT22细胞损伤,提高细胞存活率,随Macelignan浓度的提高改善神经元的生存率增强,显示神经保护作用。2.ELISA检测表明,Macelignan可抑制谷氨酸导致的HT22细胞MDA产生,促进HT22细胞SOD活性,显示了Macelignan的抗氧化能力。3.倒置显微镜结果表明,Macelignan明显抑制了谷氨酸诱导的细胞萎缩和凋亡,细胞形态趋于正常,提高细胞突起量,增强了神经元之间的突连接网络,细胞增殖明显,显示其神经保护作用。4.TUNEL染色表明,Macelignan可以抑制谷氨酸诱导的阳性凋亡细胞。5.免疫荧光染色和蛋白印迹实验也表明,Macelignan和PI3K抑制剂LY294002通过抑制p-PI3K、p-AKT、FoxO3a、NF-k B、Cyclin D1以及Cleaved-Caspase3等蛋白表达,促进Klotho的表达,抑制谷氨酸所诱导的神经元凋亡。结论:1.Macelignan抑制谷氨酸诱导的神经元凋亡,增强Klotho的表达,具有神经保护作用。2.Macelignan可能通过PI3K/Akt/FoxO3a信号通路,调控神经元凋亡。
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