加味润肺清肝汤对2型糖尿病大鼠Keap1-Nrf2/ARE信号通路的影响

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目的:本实验研究加味润肺清肝汤通过调控Keap1-Nrf2/ARE氧化应激信号通路,对2型糖尿病大鼠的生理状态及血糖,氧化应激指标及相关蛋白等的影响,求证朝药加味润肺清肝汤对2型糖尿病的治疗疗效及前景。方法:1.加味润肺清肝汤(RFQG)制备:药材浸泡2.5 h,蒸煮过滤两次,旋蒸浓缩后制成冻干粉。2.实验动物准备:将48只SD大鼠取出8只作为空白组,剩余40只SD大鼠高脂高糖饲料喂养4周后禁食12 h,采用腹腔注射法注射30 mg/kg·BW链尿佐菌素(Streptozotocin,STZ),72 h后断尾取血测量空腹血糖,空腹血糖值超过11.1 mmol/L,则视为糖尿病大鼠模型建立成功。3.将造模成功的30只大鼠随机分为模型组、加味润肺清肝汤高、中、低剂量组、阳性组,每组各6只。分组灌胃:模型组(灌胃蒸馏水)、高剂量组(灌胃400 mg/kg·BW的RFQG)、中剂量组(灌胃200 mg/kg·BW的RFQG)、低剂量组(灌胃100 mg/kg·BW的RFQG)、阳性组(灌胃200 mg/kg·BW的盐酸二甲双胍),灌胃周期6周。4.指标测定:实验过程中,每周测量一次体重和禁食8小时后的空腹血糖(Fasting blood gloucose,FBG)值。灌胃结束,测定糖耐量水平(Oral Glucose Test,OGTT),大鼠腹主动脉取血,检测甘油三酯(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,LDL-C)、高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein,HDL-C)及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catelase,CAT)、谷胱甘肽(Glutataione,GSH)氧化应激相关指标。取肝脏组织,采用HE-染色法测定肝脏的病理变化。采用Western Blot法测视网膜ECH相关蛋白1(ECH-associated protein1,Keap1)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子NF-E2相关因子(nuclear factor erythroid-2,Nrf2)、醌氧化还原酶NADH1(NADH Quinone Oxidoroductase 1,NQO1)蛋白的表达。结果:1.经加味RFQG汤治疗后,高剂量组与模型组比体重下降缓慢,有显著性差异(P<0.05);加味RFQG汤降血糖效果显著,高剂量组FBG极显著下降(P<0.01)。2.高剂量组与模型组相比OGTT水平极显著下降(P<0.01)。3.与模型组相比,高剂量组TG、TC、LDL-C水平极显著下降(P<0.01),HDL-C水平极显著升高(P<0.01)。4.加味RFQG汤可有效缓解氧化应激,高剂量组与模型组相比,MDA水平显著下降(P<0.05),SOD、GSH、CAT水平极显著升高(P<0.01)。5.HE-染色结果显示,模型组图中肝细胞索排列紊乱,细胞产生融合边界不清,细胞形态不一,肝门管区域见到大量的炎性细胞浸润,肝细胞胞浆内存在许多空泡变性;高剂量组与阳性组图中肝细胞索排列较有序,部分细胞存在融合,但普遍边界清晰,肝门管区有少许炎性细胞浸润。6.Western Blot法分析,与空白组相比较,模型组Keap1蛋白表达显著上调(P<0.05),NQO1、HO-1、Nrf2蛋白表达极显著下调(P<0.01);与模型组相比,中剂量组Keap1蛋白表达极显著下调(P<0.01);高剂量组NQO1蛋白表达极显著上调(P<0.01),中剂量组NQO1蛋白表达水平显著上调(P<0.05);高剂量组HO-1蛋白表达极显著上调(P<0.01),中剂量组HO-1蛋白表达显著上调(P<0.05);中剂量组Nrf2蛋白表达水平极显著上调(P<0.01)。结论:加味RFQG汤可通过调控Keap1-Nrf2/ARE氧化应激信号通路,有效调控2型糖尿病大鼠体重、FBG、OGTT、血脂等指标,改善2型糖尿病大鼠氧化应激水平,减轻肝脏损伤,对治疗2型糖尿病有显著疗效。
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