河北杨再生体系及遗传转化体系建立研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liongliong563
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本研究以河北杨(Populus hopeiensis Hu et Chow)1年生嫩枝为外植体,通过对不同培养阶段最佳培养基与生长调节剂浓度的筛选,建立了河北杨的高效再生体系。并在此基础上,以河北杨无菌苗叶片为受体材料,利用农杆菌介导法转化WOX基因,对影响转化效率的主要因素进行了研究,为河北杨提供高效、安全、规模化遗传转化改良平台,也为其他杨树遗传转化培育新品种及相关基因功能研究提供理论和技术参考。主要研究结果如下:1.河北杨再生体系的建立:最佳消毒方法为先用75%酒精消毒30 s,再用0.1%升汞消毒12 min,消毒效果最好,污染率最低为10%,死亡率为13.33%;茎段诱导腋芽最佳培养基为1/2MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.05 mg·L-1 NAA,腋芽萌发时间为7d,诱导率为95%;最佳生根培养基为1/2MS+0.3 mg·L-1 IBA+0.05mg·L-1 NAA,生根率达100%;炼苗移栽基质配比为草炭土:蛭石:珍珠岩=6:3:1(v/v/v),成活率达93.7%。2.河北杨遗传转化受体体系的建立:叶片诱导不定芽最佳培养基为MS+0.3 mg·L-1 TDZ+0.4 mg·L-1 IBA,叶片经过暗培养12d后,转入弱光照下培养,有利于叶片不定芽的分化,每个外植体上平均分化不定芽数为11.04个;叶片诱导不定芽和生根的潮霉素浓度均为3.Omg·L-1,且不会影响叶片诱导不定芽及生根;抑菌剂特美汀浓度为400 mg·L-1,能有效抑制农杆菌生长,同时对叶片分化影响最小。3.河北杨农杆菌介导最佳转化条件为:预培养时间为1 d,在OD600=0.6的菌液中侵染10 min,共培养3d,经过不定芽再生选择培养和不定芽生根选择培养,共获得58株抗性植株。将获得的58株抗性植株进行PCR检测,结果显示有17株呈阳性反应,转化率为29.3%,证明了WOX基因己被导入到河北杨基因组中。
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