原发性卵巢功能不全(primary ovarian insufficiency，POI)是指正常发育的女性在40岁以前由于各种因素引起的卵巢功能提前衰退的疾病。其表现为继发闭经、低雌激素：雌二醇（estradiol,E2<73.2 pmol／l)和高促性腺激素：卵泡刺激素（follicle stimulating hormon，FSH）>40 IU／L、黄体生成素（luteinizing hormon， LH）>30 IU／L)。POI病因复杂，大部分病例找不到明确的病因，约占POI的74-90％。病因不明给治疗上带来很大的困难。POI可发生在青春期前、青春期或生育期。POI患者卵巢组织学呈围绝经期或老年妇女绝经后的变化。据统计，40岁前POI的发病率约为1％，30岁前的发病率约为0．1％，20岁前发病率约为0．01%。据流行病学统计，POI有发病率升高、发病年轻化的趋势。　　POI是病程较长的一种疾病，且病程中受到多种因素的影响，有个体差异性。不同背景的POI病人，临床表现可各有侧重。POI临床表现为闭经，可表现为原发性闭经或继发性闭经。继发性闭经的女性里，POI约占4%-18%。临床表现还有失眠、烦躁、潮热、阴道干涩、性欲下降等围绝经期症状。患者体内雌激素水平低，还可能出现脂质代谢紊乱，进而引起动脉硬化、冠心病、骨质疏松症等，患者还容易出现抑郁、焦虑、躁狂等精神问题，并且POI是引起不孕的一个很重要的病因。可见POI严重影响妇女的身心健康。　　POI是一种异质性疾病，它的病因复杂多样。有些病例能找出病因，其病因包括有遗传、内分泌、自身免疫、代谢障碍、感染、医源性和外界环境等，然而迄今为止，大部分POI的病因尚不清楚，属特发性POI。大量研究表明POI具有明显的家族聚集性，其同胞中约50％有患病的风险，因此认为其发病与遗传因素有关。POI可能是少数几种主要的致病因素与环境因素之间相互作用的结果，而且对于不同种族、不同家庭，起关键作用的基因可能不同。伴随着分子生物技术的快速发展和人类基因组计划的发展，发现新的POI易感基因并且在基因水平上阐述发病机制是研究的热点。　　POI的病理生理特点是先天卵子数目减少，正常的卵泡闭锁有所加速或出生后卵子因各种机制被破坏导致卵泡过早消耗殆尽。卵泡的发生发育不仅受下丘脑-垂体-卵巢轴控制，和卵泡刺激素有关，并且受卵巢内某些自分泌与旁分泌激素影响。在卵巢中，细胞凋亡调控着卵泡的繁殖和分化，并参与卵巢周期中的卵泡闭锁过程，细胞凋亡加快了卵泡闭锁。卵泡的生成与凋亡的调节分为内分泌和旁分泌，促性腺激素与卵巢自分泌、旁分泌因子构成的微环境对卵泡的正常生长和分化起到非常重要的作用，若失去上述微环境平衡及破坏卵泡发育条件可能导致卵泡闭锁。　　研究表明有多种基因参与 POI的调控，其中细胞色素 P450C17酶（ cytochrome P45017 hydroxylase， CYP17）、儿茶酚氧位甲基转移酶( catechol-O-methyltransferase, COMT)基因多态性与多种雌激素（estrogen E）相关疾病的关系，CYP17、COMT是雌激素合成和代谢中的关键酶，其基因多态可能改变酶含量和酶活性影响雌激素的代谢及生物学效应，造成内分泌激素的紊乱，改变月经周期，发展为闭经，严重者发生POI。　　2.目的:　　本研究拟筛查POI患者CYP17及COMT基因遗传学改变，建立CYP17及COMT基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphysim,SNP）与POI的风险评估体系，为POI的临床个体化治疗及预后提供参考依据。　　3.方法:　　研究对象：选取2014年2月至2015年9月在深圳妇幼保健院妇科门诊确诊的无明确病因的POI患者132例作为病例组。病例组需同时符合以下标准：（1）、年龄小于40周岁，有4个月经周期或以上无月经来潮；（2）、最少两次测量空腹血清FSH>40IU/L(间隔1个周期或以上)；（3）、血清催乳素(prolactin，PRL)水平无异常；（4）、排除染色体异常、免疫、感染、手术损伤、放化疗等致病因素。对照组为同期因其他原因就诊的年龄相仿的132例月经规律、性激素检查正常、彩超示卵巢形态无异常的妇女。　　研究方法：（1）利用饱和酚/氯仿法提取外周血中白细胞里的DNA，设计10对DNA片段的引物，通过对PCR产物测序后行序列分析。（2）用卡方检验对CYP17、COMT基因型频率和等位基因型频率在POI组和对照组的分布进行统计学分析。（3）对基因型频率或等位基因型频率有统计学意义（p<0.05）的SNPs使用二分类Logistic回归分析，予以判断是否为POI的发病因素，探讨CYP17、COMT基因突变导致POI的遗传学机制。　　4.结果：　　（1）CYP17、COMT基因测序结果分析　　CYP17基因的突变位点，共发现了6个SNPs，都为二等位基因型。转换6个（2个A/G，3个T/C，1个G/A）。在病例组与对照组中均也检测到COMT基因的突变位点，共发现了4个SNPs，都为二等位基因型。转换3个（2个A/G，1个C/T），颠换1个（G/T）。　　CYP17基因的测序发现的6个SNPs中有2个为新发现，为内含子G-14A和外显子c.61 G>A，其余4个为NCBI的SNPs数据库中已有记录。　　（2）CYP17、COMT基因型在病例组与对照组中的分布　　对CYP17基因发现的6个病例组和对照组都出现的SNPs进行统计学分析，发现Rs1004467（c.666+35T>C）的等位基因频率和基因型频率在病例组和对照组间差异无统计学意义（P>0.05），rs743572（T-34C）、rs6162（c.138C>T）、rs6163(c.200G>T)的等位基因频率和基因型频率在POI组和对照组间差异具有统计学意义（P<0.05）。　　对COMT基因中的4个病例组和对照组都出现的SNPs进行统计学分析，发现A-98G、Rs6267c.214G>T的基因型以及等位基因频率在病例组与对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。A-91G、Rs4633(c．186C>T)的基因型频率在病例组与对照组间差异具有统计学意义（P<0.05）,但是其等位基因频率在两组之间差异无统计学意义（P>0.05）。　　用二分类Logistic回归统计分析上述CYP17基因3个突变位点、COMT基因2个突变位点是否为POI的发病因素，结果提示CYP17基因的 rs743572（T-34C）、rs6162（c.138C>T）、rs6163(c.200G>T)，COMT基因的A-91G在POI组与对照组间差异具有统计学意义（P<0.05），COMT基因的Rs4633(c．186C>T)在病例组及对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。　　5、结论:　　（1）CYP17基因的rs743572（T-34C）、rs6162（c.138C>T）、rs6163(c.200G>T)的等位基因频率和基因型频率在POI组和对照组间差异有统计学意义。用二分类Logistic回归统计分析也得出上述3个突变位点可能为POI的发病危险因素，得出CYP17基因突变可能在中国汉族人群POI病因学方面起作用。　　（2）COMT基因的A-91G、Rs4633(c．186C>T)的基因型频率在POI组与对照组间差异有统计学意义。用二分类Logistic回归统计分析得出A-91G突变位点可能为POI的发病危险因素。提示COMT基因中的突变位点可能与中国汉族人群POI的病因学方面有相关关系。　　（3）CYP17、COMT基因的突变有可能是中国汉族人群POI病因，以上结论仍需进一步深入研究。