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目的探讨钙蛋白酶Ⅰ及钙蛋白酶Ⅱ(CalpainⅠ及CalpainⅡ)在实验性自身反应性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)大鼠脑中的表达。EAE是由T淋巴细胞介导的,以中枢神经系统脱髓鞘、血脑屏障(blood-brain barrire,BBB)破坏及脑脊髓实质和血管周围单核淋巴细胞浸润为特征的实验动物的自身免疫性疾病。Calpain是一种钙依赖中性蛋白酶,已有研究证明其参与EAE的发病过程。本实验采用Wistar大鼠建立EAE模型,动态观察EAE发病过程中不同时期脑皮质区的CalpainⅠ及CalpainⅡ表达的变化,以阐明利用Wistar大鼠建立EAE模型的可行性,同时探讨EAE发病的病理机制,为临床治疗急性播散性脑脊髓炎(Acute disseminated encephalomyelitis ADEM)提供理论基础,为Calpain抑制剂的应用时机、治疗持续时间等提供理论依据。方法1、选用我院提供的胎龄6~8周的Wistar大鼠为研究对象,以豚鼠脑脊髓匀浆加完全福氏佐剂作为抗原,给予Wistar大鼠四足垫皮内注射,足背辅以注射百日咳原液,建立EAE模型。2、通过HE染色在光镜下观察EAE大鼠脑的病理学改变;3、对正常组、免疫后7d组、发病后3d、7d、14d及21d组,分别进行BrdU和GFAP免疫组织化学染色,动态观察EAE大鼠在以上不同时段各组鼠脑内CalpainⅠ和Cal painⅡ的分布及表达的变化规律。结果1、光镜下可见EAE组大鼠脑和脊髓组织中有大量炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主,血管内皮细胞增生、肿胀、破坏,胶质细胞增生,炎性细胞聚集在血管周围呈典型的“袖套”样改变;脑膜和脊膜也有炎性细胞浸润。对照组大鼠脑和脊髓均未见异常。2、CalpainⅠ阳性细胞存在于胞浆中,染色成棕黄色。正常对照组大鼠脑组织中可见的CalpainⅠ阳性细胞极少。在给予豚鼠脊髓匀浆免疫后CalpainⅠ阳性细胞逐渐增多,在发病后7d达高峰,且染色反应增强,然后逐渐下降,21天仍高于正常,与正常对照组相比有统计学意义(P<0.05);正常对照组CalpainⅠ阳性细胞数与免疫后7d、发病后3d、7d、14d及21d相比均有统计学意义(P<0.05);发病后7d组与其他各组相比均有统计学意义(P<0.05)。3、CalpainⅡ阳性细胞存在于胞浆中,染色成棕黄色。正常对照组大鼠脑组织中可见的CalpainⅡ阳性细胞极少。在给予豚鼠脊髓匀浆免疫后CalpainⅡ阳性细胞逐渐增多,在发病后3d达高峰,然后逐渐下降,21天仍高于正常;正常对照组CalpainⅡ阳性细胞数与免疫后7d、发病后3d、7d、14d及21d相比均有统计学意义(P<0.05);发病后3d组与其他各组相比均有统计学意义(P<0.05);发病后7d组与发病后14d组相比无统计学意义(P>0.05)结论EAE模型建立方法稳定、可靠,成功率高。CalpainⅠ和CalpainⅡ在正常大鼠的CNS中广泛存在。EAE发病过程中,CalpainⅠ和CalpainⅡ在鼠脑皮质区表达增高。