诺丽的化学成分分析及抗肿瘤、抗糖尿病活性研究

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诺丽(Noni),即茜草科(Rubiaceae)巴戟天属(Morinda)植物海巴戟(Morinda citrifolia L.),是一种生长于热带及亚热带地区的多年生常绿阔叶灌木或小乔木。波利尼西亚土著将其作为民间药物使用已有2000多年历史,发酵果汁和果干是其最主要的应用形式。由于缺乏科学的评价方法和统一的工艺标准,其制作过程呈现“因时、因地、因人而异”的现状;此外,诺丽果实抗肿瘤活性的物质基础尚不明确,且采用传统发酵方式所得诺丽果汁的抗糖尿病活性研究也鲜见报道。针对以上问题,本论文对诺丽的发酵过程、提取及烘干工艺和抗肿瘤、抗糖尿病活性等内容进行了研究,具体内容如下:  (1)采用HPLC-ESI-MS/MS技术从诺丽发酵果汁中鉴定了11种化合物,其中4种为首次从该植物中发现,2种为首次从诺丽发酵果汁中发现。在此基础上,建立了一种同时测定诺丽发酵果汁中7种成分的HPLC分析方法,并将此方法成功运用于十批市售的诺丽发酵果汁样品的测定中。  (2)针对诺丽发酵工艺中最为突出的发酵时间问题,本论文以诺丽鲜果为研究对象,按照传统发酵工艺对其进行发酵,同时监测其在发酵过程中pH、总多糖、可溶性蛋白、总酚、总黄酮及上述7种主要单体成分的动态变化规律,并运用三种抗氧化活性评价体系对各发酵阶段的发酵果汁抗氧化活性进行评估,研究结果表明,发酵3个月左右的诺丽果汁中有效物质含量及活性最佳,进一步分析各成分含量与抗氧化活性动态变化的相关性,发现总酚是诺丽发酵果汁的主要抗氧化物质,其中又以东莨菪亭起关键作用。  (3)本论文采用响应面法对诺丽果干中总酚的超声提取工艺进行了优化,确定最佳工艺为:将诺丽果干粉碎后过3#药典筛(0.25mm<粒径<0.355mm),按照料液比1:21加入浓度为42%乙醇(v/v),在超声频率为100kHz、提取温度为62℃条件下提取43min。基于以上提取工艺,对自然晒干、烘箱烘干及冷冻干燥所得的诺丽果干中总酚进行提取,并对比分析其含量差异以及主要成分组成的变化情况,研究结果表明,60℃烘箱烘干法在干燥时间及酚类成分的保留上具有明显优势,是一种经济可靠的干燥方式。  (4)本论文还采用胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法筛选了诺丽抗A549细胞的活性部位,并对活性相对较强的二氯甲烷部位进行系统分离,从中鉴定了7种主要成分,其中3种为首次从该植物发现。进一步对分离所得7种成分进行抗A549细胞活性筛选,结果表明熊果酸和槲皮素具有较强的抑制作用,并运用实时细胞分析技术(RTCA)进一步印证不同浓度熊果酸和槲皮素对A549细胞的生长抑制作用。熊果酸和槲皮素可能是诺丽中主要的抗肿瘤活性成分。  (5)本论文还通过尾静脉注射四氧嘧啶法建立糖尿病小鼠模型,以发酵3个月的诺丽果汁为对象,研究了其对糖尿病小鼠血糖、血脂等指标的影响,并初步探讨了其可能的作用机理。研究结果表明,诺丽发酵果汁能明显降低糖尿病模型小鼠的葡萄糖耐受量、GSP、TG及LDL,同时能升高INS和HDL,并能改善胰岛组织受损情况,进而改善糖尿病小鼠糖和脂代谢紊乱,对糖尿病有一定的防治作用,其作用机制可能与恢复胰岛组织功能、促进胰岛素分泌有关。
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