【摘 要】
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为了在体外研究G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase,GRK5)与G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)的相互作用机制,我们在该工作中实现了GRK5
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为了在体外研究G蛋白偶联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase,GRK5)与G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)的相互作用机制,我们在该工作中实现了GRK5在大肠杆菌中的表达与纯化.通过RT-PCR扩增得到了人GRK5的基因,将其克隆到表达载体Pet-28a中,并将该质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),在10μmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导培养下表达.通过一系列的分离纯化步骤,得到部分纯化的GRK5蛋白.进一步在体外进行了活性测定,结果表明纯化后的GRK5能够特异性地磷酸化视紫红质.动力学分析表明它的动力学常数(K<,m>和V<,max>)与文献报道的从真核表达系统中纯化得到的GRK5相近.以上结果表明从大肠杆菌中得到的重组GRK5蛋白具有与从真核细胞中表达得到的GRK5相似的性质.
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