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中药注射剂是我国独创的新剂型,具有生物利用度高、作用迅速等特点,已广泛应用于危重疾病的急救及感染性、心脑血管和恶性肿瘤等疾病的治疗。随着中药注射剂在临床的广泛应用,其不良反应,尤其是速发型超敏反应的发生逐渐增多。速发型超敏反应包括Ⅰ型过敏反应和类过敏反应,两者临床症状、诊断及治疗方法类似,因此临床常将类过敏反应诊断为Ⅰ型过敏反应。目前临床前安全性评价中尚没有用于中药注射剂类过敏反应评价的模型,无法对中药注射剂进行有效的类过敏反应评价,因此,建立敏感可靠的类过敏反应检测模型是筛选中药注射剂致敏原的前提,对于中药注射剂的生存、发展和再创新十分重要。本研究是“国家重大新药创制——中药注射剂致敏性检测关键技术的研究”课题的重要组成部分。实验一、大鼠类过敏反应检测模型的建立与应用目的：建立可应用于中药注射剂的大鼠类过敏反应检测模型,并对清开灵注射液和葛根素注射液进行类过敏反应检测。方法：利用组胺、Compound 48/80、Tween 80、聚氧乙烯蓖麻油(CrEL)、放射性造影剂(RCM,优维显和泛影葡胺)、万古霉素对平均动脉血压(MABP)作为类过敏反应检测指标的灵敏性和可靠性进行探讨；检测大鼠注射Compound 48/80、Tween 80和CrEL后血浆组胺和补体末端复合物(SC5b-9)的变化,评价其作为类过敏反应检测指标的灵敏性和可靠性；应用建立的模型对清开灵注射液和葛根素注射液的类过敏反应进行检测。结果：静脉注射组胺、Compound 48/80、优维显、泛影葡胺和万古霉素可引起大鼠MABP显著下降,注射Tween 80、CrEL对大鼠MABP影响不明显；注射Compound 48/80、Tween 80和CrEL后,大鼠血浆组胺水平有显著上升而SC5b-9升高不明显；清开灵注射液能够对大鼠产生剂量依赖性和给药速度依赖性的MABP下降,并引起组胺水平的升高；葛根素注射液能够对大鼠产生剂量和给药速度依赖性的MABP下降,并引起SC5b-9水平的升高。结论：大鼠类过敏反应检测模型对RCM、万古霉素和中药注射剂类过敏物质具有良好的灵敏性；清开灵注射液和葛根素注射液可引起剂量依赖性和给药速度依赖性的类过敏反应。实验二、Beagle犬类过敏反应检测模型的建立与应用目的：建立可应用于中药注射剂的Beagle犬类过敏反应检测模型,并对清开灵注射液和葛根素注射液进行类过敏反应检测。方法：利用Compound 48/80、Tween 80、CrEL、RCM和万古霉素对Beagle犬血浆组胺、免疫球蛋白E(IgE)、SC5b-9以及MABP、呼吸频率(RF)和心率(HR)等生理指标作为类过敏反应检测指标的敏感性进行研究；应用建立的模型对清开灵注射液和葛根素注射液的类过敏反应进行检测。结果：注射Compound 48/80、Tween 80、CrEL、RCM、万古霉素后Beagle犬血浆组胺水平明显升高,但无IgE水平的变化；其中Compound 48/80、Tween 80、CrEL和泛影葡胺可引起SC5b-9的升高和MABP的明显降低；清开灵注射液300 ml/h给药速度(临床最快滴注速度)下能够引起Beagle犬血浆组胺水平的升高；葛根素注射液在90 ml/h(临床缓慢滴速)和300 ml/h给药速度下可引起Beagle犬血浆组胺和SC5b-9水平的升高,同时可引起MABP下降。结论：Beagle模型对增溶剂、泛影葡胺和中药注射剂中存在的补体激活物质具有良好的灵敏性；清开灵注射液和葛根素注射液可引起给药速度依赖性的类过敏反应,葛根素注射液引起的类过敏反应与补体激活有关。实验三、家猫安全性评价模型在类过敏反应检测中的应用目的：应用2005版《药典》标准的安全性检查法对清开灵注射液和葛根素注射液进行降压物质检查。方法：按照药典规定的标准“降压物质检查法”对清开灵注射液和葛根素注射液进行降压物质检查。结果：清开灵注射液降压物质检查符合要求；葛根素注射液降压物质检查不符合要求。结论：清开灵注射液具有降压趋势,而葛根素注射液的降压物质检查没有达到药典要求。实验四、小鼠皮肤血管渗透性类过敏反应检测模型的改进与应用目的：对原有小鼠皮肤血管渗透性实验模型进行方法学改进,并应用于清开灵注射液和葛根素注射液的类过敏反应检测。方法：对小鼠皮肤血管渗透性实验方法进行方法学验证,建立误差最小的检测方法；对小鼠血管渗透性假阳性结果进行分析,排除假阳性结果的影响；通过Compound 48/80、Tween 80、CrEL、RCM、万古霉素等临床报道有类过敏反应发生的药物对小鼠类过敏反应检测模型进行敏感性分析；应用建立的模型对清开灵注射液和葛根素注射液进行类过敏反应检测。结果：组织浸出液在610 nm处具有最大吸收波长和最佳检测灵敏度；采用注射依文思蓝15 min后背部皮下注射药物可避免假阳性结果的发生；清开灵注射液和葛根素注射液均可引起皮肤血管渗透性增加。结论：小鼠皮肤血管渗透性类过敏反应检测模型背部皮下给药、注射依文思蓝15 min后注射受试药物具有良好的敏感性并可避免假阳性结果的发生；清开灵注射液和葛根素注射液可以引起小鼠皮肤血管渗透性增加。