抗脑衰胶囊由人参、制何首乌、党参、黄芪、熟地黄、山药、丹参、黄芩、枸杞子、白芍、远志、茯神、石菖蒲、葛根、酸枣仁、麦冬、龙骨(粉)、香附、菊花等19味药材组成。用于因肾精不足、肝气血亏所引起的精神疲惫、失眠多梦、头晕目眩、体乏无力、记忆力减退。药理实验表明本品对神经衰弱、记忆力减退、老年性痴呆症、血管障碍型痴呆症、脑萎缩、脑梗塞、脑血栓后遗症、高血压所致脑循环不全,以及脑外伤所致的记忆力障碍、体虚乏力、厌食、失眠及大脑发育不全等症有独特的疗效。本研究采用反相高效液相色谱法建立了同时测定抗脑衰胶囊中七种有效成分的分析方法。建立了不同生产批次,不同生产厂家抗脑衰胶囊的HPLC指纹图谱,并对抗脑衰胶囊中主要色谱特征峰进行了分析,确定了主要色谱特征峰在抗脑衰胶囊组成药材中的归属,为阐明中药复方制剂的药效物质基础提供了有效的分析方法。方法专属性强,灵敏快速、结果准确可靠,精密度和稳定性良好。本研究对抗脑衰胶囊进行了综合的质量控制与评价,为保证中药复方制剂的质量提供了良好的质量控制与评价方法。第一部分抗脑衰胶囊中有效成分的多组分同时测定目的:用反相高效液相色谱法建立中药复方制剂抗脑衰胶囊中有效成分的多组分同时测定方法,并将建立的方法用于不同批次,不同生产厂家的抗脑衰胶囊中有效成分的含量测定,并对含量测定结果加以比较,为科学有效的评价并控制抗脑衰胶囊的质量提供新的方法。方法:(1)提取方法:比较了不同提取方式、提取溶剂及提取时间对抗脑衰胶囊有效成分的提取效率,选择提取成分多,提取效率高的提取方法。(2)高效液相色谱条件的优化:选用合适的色谱柱及检测方法,优化流动相的组成、配比、梯度洗脱程序、柱温等影响因素,确定最佳的色谱条件。(3)系统适用性试验:计算抗脑衰胶囊中有效成分黄芩苷的理论塔板数,及各有效成分与相邻峰的分离度。(4)标准曲线的制备:配制一系列浓度的混合对照品溶液,进样分析测定峰面积;以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,经回归处理得各标准曲线方程。(5)定量限以及检测限试验:将混合对照品溶液逐步稀释并进行测定,以信噪比S/N≥10时确定为定量限,以信噪比S/N≥3时确定为检测限。(6)仪器精密度试验:取同一对照品溶液,重复进样6次,以所测有效成分的色谱保留时间以及色谱峰面积计算仪器精密度。(7)日内及日间精密度试验:取同一批次样品,在同一天精密称取6份,平行制备样品溶液,并对样品溶液进样进行分析,以所测有效成分的保留时间和峰面积计算日内精密度;取同一批次样品,在同一天精密称取2份,平行制备样品溶液,对样品溶液进样进行分析,连续测定3天,以所测有效成分的保留时间和峰面积计算日间精密度。(8)稳定性试验:取同一样品溶液置于室温,并分别于0、2、4、6、8、24、48h进样分析并进行有效成分的含量测定。(9)加样回收率试验:取同一批次并已知含量的样品,精密称定9份,分别精密加入高、中、低3种浓度的对照品混合物,按照供试品溶液制备方法进行制备,对样品溶液进样进行分析,并对有效成分的含量进行测定并计算加样回收率。(10)专属性试验:在上述色谱条件下,对阴性对照样品进样分析,将所得色谱图与样品色谱图进行比较,以排除抗脑衰胶囊中其它组成药材中化学物质的干扰。(11)抗脑衰胶囊中有效成分的含量测定:对不同批次,不同生产厂家的抗脑衰胶囊中有效成分的含量进行测定。结果:抗脑衰胶囊中有效成分的多组分同时测定方法(1)提取方法:精密称取恒温干燥后的抗脑衰胶囊内容物约0.1g,用50%甲醇超声提取30 min,使各有效成分在提取方式相同的条件下同时达到最大的提取效率,且提取方法稳定。(2)HPLC色谱条件:采用Waters SunfireTM-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm I.D., 5μm),以乙腈(A)-0.05%磷酸(B)为流动相进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为:0~15 min,12%~20% A;15~30 min,20%~45% A;30~40 min,45%~75% A;40~50 min,75%~100% A;50~55 min,100%~12% A。采用Variable Wavelength Detector(VWD)紫外检测器以波长转换的方式进行检测,VWD检测波长时间变化程序为:0.00~6.10 min,320 nm;6.10~8.50 min,248 nm;8.50~15.00min,230 nm;15.00~25.00 min,320 nm;25.00~27.10 min,275 nm;27.10~32.50 min,286 nm;32.50~50.00 min,275 nm。(3)系统适用性试验:在此色谱条件下,以黄芩苷计算的理论塔板数大于6000,且其与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。(4)标准曲线的制备:对混合对照品溶液进样分析,以最小二乘法对峰面积和浓度进行线性回归得到各组分的标准曲线方程,其线性关系均符合要求。(5)定量限以及检测限试验:成分1~7的检测限分别为4.90、16.40、13.30、4.26、1.98、3.88、1.04 ng/ml;成分1~7的定量限分别为19.58、65.68、6.65、17.03、7.92、7.76、2.08 ng/ml。(6)仪器精密度试验:以有效成分的保留时间计算所得仪器精密度的RSD%均小于0.24;以有效成分的峰面积计算所得仪器精密度的RSD%均小于0.85。(7)日内及日间精密度试验:以有效成分的保留时间计算所得日间精密度的RSD%均小于0.37,以有效成分的峰面积计算所得日间精密度的RSD%均小于3.03;以有效成分的保留时间计算所得日内精密度的RSD%均小于0.46,以有效成分的峰面积计算所得日内精密度的RSD%均小于2.94(8)稳定性试验:以有效成分1~7的保留时间计算所得稳定性试验的RSD%均小于1.35,以有效成分1~7的峰面积计算所得稳定性试验的RSD%均小于1.11,样品在48h内稳定。(9)加样回收率试验:高、中、低3种浓度的加样回收率都在90.0%~108.3%之间,RSD%小于4.72。(10)专属性试验:在上述色谱条件下,对阴性对照样品进样分析,将所得色谱图与样品色谱图进行比较,阴性样品溶液在样品有效成分出峰位置没有干扰。(11)抗脑衰胶囊中有效成分的含量测定:依据所建立的色谱条件对不同批次,不同生产厂家的抗脑衰胶囊中有效成分的含量进行同时测定,由标准曲线计算得到各个样品中有效成分的含量。结论:本研究采用反相高效液相色谱法建立了抗脑衰胶囊中有效成分的多组分同时测定方法。采用波长转换的方式以各待测组分的最大吸收波长作为相应组分的检测波长,最大程度的发挥了紫外检测器的检测效能,提高了检测灵敏度。方法专属性强,灵敏快速、结果准确可靠,精密度和稳定性良好。本研究建立的方法可以用于抗脑衰胶囊中多个有效成分含量的同时测定,为保证中药复方制剂的质量提供了良好的质量控制方法。第二部分抗脑衰胶囊的高效液相色谱指纹图谱研究目的:用反相高效液相色谱法建立中药复方制剂抗脑衰胶囊的HPLC指纹图谱,将所建立的方法用于建立不同批次,不同生产厂家的抗脑衰胶囊的HPLC指纹图谱,并对指纹图谱结果加以比较,为科学有效的评价并控制抗脑衰胶囊的质量提供新的方法。同时将建立的方法用于抗脑衰胶囊组成药材的HPLC指纹图谱的建立,并对抗脑衰胶囊中主要色谱特征峰在组成药材中的来源进行归属,为阐明抗脑衰胶囊的药效物质提供科学有效的方法。方法:(1)提取方法:比较了不同提取方式、提取溶剂及提取时间对抗脑衰胶囊有效成分的提取效果,选择提取成分多,提取率高的提取条件。(2)HPLC色谱指纹图谱条件的优化:选用合适的色谱柱及紫外检测器检测波长,优化流动相的组成、配比、梯度洗脱程序,柱温等影响因素,确定最佳的HPLC指纹图谱条件。(3)系统适用性试验:计算抗脑衰胶囊中有效成分黄芩苷的理论塔板数,及其与相邻色谱峰的分离度。(4)仪器精密度试验:取同一供试品溶液,重复进样6次,以高效液相色谱图中主要成分的色谱保留时间以及色谱峰面积计算仪器精密度。(5)重复性试验:取同一批次样品,精密称取6份,平行制备样品溶液,对样品溶液进样分析,根据高效液相色谱图中主要成分的色谱保留时间以及色谱峰面积对重复性进行评价。(6)稳定性试验:取同一样品溶液置于室温,并分别于0、2、4、6、8、24、48h对样品溶液进行分析,根据高效液相色谱图中主要成分的色谱保留时间以及色谱峰面积对稳定性进行评价。(7)专属性试验:在上述色谱条件下对空白溶液、样品溶液进样分析并进行对比,以排除空白干扰。(8)抗脑衰胶囊指纹图谱分析:对不同批次,不同生产厂家的抗脑衰胶囊以及抗脑衰胶囊组成药材进行样品制备,并进行高效液相色谱指纹图谱分析。(9)指纹图谱数据分析:采用指纹图谱相似度计算软件对所得高效液相色谱指纹图谱数据进行分析和比较,使得数据结果可以有效的反映不同生产批次以及不同生产厂家的抗脑衰胶囊质量的差异。并对所得抗脑衰胶囊以及抗脑衰胶囊组成药材的高效液相色谱指纹图谱进行分析,对抗脑衰胶囊中主要色谱特征峰在组成药材中的来源进行归属。结果:抗脑衰胶囊的HPLC指纹图谱研究(1)提取方法:精密称取恒温干燥后的抗脑衰胶囊样品,用50%甲醇超声提取30min,各主要成分在提取方式相同的条件下同时达到最大的提取效率,且提取方法稳定。(2)HPLC色谱指纹图谱条件:采用Waters SunfireTM-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm I.D., 5μm),以乙腈(A)-0.05%磷酸(B)为流动相进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为:0~30 min,3%~30% A;30~40 min,30%~65% A;40~50 min,65%~100% A;50~55 min,100%~3% A。采用Photodiode Array Detector(PDA)紫外检测器进行检测,检测波长为200 nm,波长扫描范围为:200~400 nm。(3)系统适用性试验:在此色谱条件下,以黄芩苷计算理论塔板数大于6000且与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5。(4)仪器精密度试验:以主要成分的色谱保留时间计算所得仪器精密度的RSD%均小于0.07;以主要成分的色谱峰面积计算所得仪器精密度的RSD%均小于1.59。(5)重复性试验:以主要成分的色谱保留时间计算所得日间精密度的RSD%均小于1.46,以主要成分的色谱峰面积计算所得日间精密度的RSD%均小于3.96。(6)稳定性试验:以主要成分的色谱保留时间计算所得稳定性试验的RSD%均小于1.35,以主要成分的色谱峰面积计算所得稳定性试验的RSD%均小于1.11,样品在48h内稳定。(7)专属性试验:供试品溶液中各色谱峰分离较好,空白对照溶液无杂质干扰。(8)抗脑衰胶囊指纹图谱分析:对不同批次,不同生产厂家的抗脑衰胶囊以及抗脑衰胶囊组成药材进行样品制备,并依据所建立的HPLC色谱指纹图谱条件进行色谱指纹图谱分析。(9)指纹图谱数据分析:采用指纹图谱相似度软件对所得高效液相色谱指纹图谱数据进行分析和比较,所得数据结果可以有效的反映不同生产批次以及不同生产厂家的抗脑衰胶囊质量的差异。对所得抗脑衰胶囊以及抗脑衰胶囊组成药材的高效液相色谱指纹图谱进行分析并对抗脑衰胶囊中主要色谱特征峰在组成药材中的来源进行归属,确定了主要色谱特征峰在抗脑衰胶囊组成药材中的来源。结论:本研究采用反相高效液相色谱法建立了不同生产批次,不同生产厂家抗脑衰胶囊的HPLC指纹图谱,并采用指纹图谱相似度计算软件对不同生产批次,不同生产厂家的抗脑衰胶囊的HPLC指纹图谱进行了分析和比较,对抗脑衰胶囊的质量进行了综合评价。同时建立了抗脑衰胶囊组成药材的HPLC指纹图谱,并对抗脑衰胶囊中主要色谱特征峰进行分析,确定了主要色谱特征峰在抗脑衰胶囊组成药材中的归属,为阐明中药复方制剂的药效物质基础提供了有效的方法。方法精密度和稳定性良好,所得数据结果可以有效的反映不同生产批次以及不同生产厂家的抗脑衰胶囊的质量差异,为保证中药复方制剂的质量提供了良好的质量控制方法。