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目的近年来，恶性肿瘤的发病率在不断地增高，严重危害了人类健康。据统计，结肠癌是发生于结肠部位的常见的消化道恶性肿瘤，占胃肠道肿瘤的第3位，死亡率排在第4位，仅次于肺癌、胃癌和肝癌，手术、放化疗三大常规治疗效果不佳，远期生存率较低，因此，如何提高治疗效果，改善患者生活质量，预防结肠癌复发和转移是需要长期探索的问题。随着分子生物学以及免疫学理论的快速发展，以及人们对免疫系统和肿瘤之间相互关系的深刻认识，肿瘤免疫治疗受到了人们越来越多的重视，免疫疗法成为了许多癌症治疗方案的核心组成部分。肿瘤免疫治疗包括被动免疫治疗和主动免疫治疗。在主动免疫治疗方面，前列腺疫苗Provenge在美国的上市，具有重大的意义。与被动免疫治疗相比，肿瘤疫苗不良反应轻微、耐受性好，兼具预防和治疗作用的优点，是一类很有开发前景的特异性药物。特别是以肿瘤相关抗原(tumor associated antigensTAAs)为基础的肿瘤疫苗备受关注。本研究旨在探讨细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)携带P53抗原多肽致敏树突状细胞(DC)诱导获得抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxiclymphocyte, CTL)，体外检测其对结肠癌细胞株的杀伤效果。为穿膜肽在肿瘤疫苗的进一步研究和临床应用提供实验依据。方法1.取健康人外周血，Ficoll分离液分离淋巴细胞，将获得的贴壁细胞（DC）分为3组：第1组加入Tat49-57-P53264–272多肽；第2组加P53264–272多肽；第3组加PBS液。三组细胞均加入rhIL-4、GM-CSF、TNF-α诱导其生长、成熟。三组成熟DC均按l:20与效应T细胞混合培养，诱导产生CTL。2. FCM检测致敏前后成熟DC细胞的表型；用乳酸脱氢酶（LDH）法检测抗原肽疫苗致敏DC后诱导CTL对结肠癌细胞株DLD1的体外杀伤活性；3.应用SPSS17.0统计软件，对所取得的数据进行分析，P<0.05表示差异有统计学意义。结果1.倒置显微镜下观察，贴壁细胞培养2～3d后由圆形逐渐变为不规则形，体积逐渐变大；5d后，细胞体积变得更大，细胞表面有大量长短不一毛刺状突起，呈典型的树突状细胞形态。2. Tat49-57-P53264–272多肽组DC表达CD86和CD40为（17.4±1.7%,18.7±1.1%）；P53264–272多肽组为（16.7±2.39%,17.9±1.48%）；PBS组则为（18.9±0.45%,17.1±2.32%）组间无明显差异(P>0.05)。3. Tat49-57-P53264–272多肽组胞p53进入DC细为95.25±2.41%，单纯P53264–272多肽组P53进入DC细胞较少，PBS组则更低，三组差异有显著统计学意义(P<0.05)。4.DC与原始T细胞共培养后，在倒置显微镜下观察可见T细胞形成大小不等的集落。5. Tat49-57-p53264–272多肽组CTL表面标志CD8+T，CD8+/CD4+的表达比例分别为87.12±2.30%，14.87±2.48%；P53264–272多肽组的表达比例分别为70.17±2.12%，9.82±1.99%；PBS组则为（20.32±1.56%9.32±1.47%）；差异具有统计学意义(P<0.05)。6. Tat49-57-P53264–272多肽组诱导CTL对DLD1结肠癌细胞株的杀伤率随着E/T比例（10∶1，20∶1，50∶1）的增加而逐渐增高，且杀伤率显著高于P53264–272多肽组和PBS组(P<0.05)。7.在效靶比一定时空白对照组对DLD1细胞和jurkat细胞的杀伤活性无明显差异，而Tat49-57-P53264–272致敏DC和P53264–272致敏DC诱导产生的CTL对DLD1细胞的杀伤活性均高于对jurkat的杀伤活性，且Tat49-57-P53264–272显著高于P53264–272的杀伤活性，其差异有显著性（P <0.05）。结论1. Tat49-57-P53264–272多肽和P53264–272多肽致敏DC，获得成熟DC细胞，在倒置显微镜观察与PBS组DC相比三组形态上无明显差异。2. Tat49-57-P53264–272多肽致敏DC细胞， P53264–272进入DC阳性细胞率较高，此结果说明穿膜肽可以携带p53多肽高效输送进入细胞内。3. Tat49-57-P53264–272组表达CD80、CD86与P53264–272组和PBS组DC无差异。4. Tat49-57-P53264–272组CTL表面标志CD3+CD8+，CD8+/CD4+的表达比例分别为73.4±9.1%,7.97±1.65%;与P53264–272组58.1±8.4%,2.99±1.41%。差异具有统计学意义(P<0.05)。5. Tat49-57-P53264–272致敏DC诱导的CTL具有较强的杀伤肿瘤细胞的能力，杀伤率随着E/T比例（10∶1，20∶1，50∶1）的增加而逐渐增高，与P53264–272组和PBS组相比，差异具有显著意义(P<0.05)。穿膜肽组诱导的CTL与白血病细胞株Jurkat对结肠癌细胞株DLD1的杀伤活力更具有特异性，杀伤力远高于对白血病细胞株Jurkat的杀伤。