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漆酶(EC 1.10.3.2)是属于蓝色多铜氧化酶(MCOs)的一个大的子群体,它可以利用铜离子独特的氧化还原能力氧化多种芳香化合物,在真菌具有广泛的功能。草菇(Volvariella volvacea)是在中国和东亚许多国家广泛栽培的重要商业栽培食用担子真菌。本实验对草菇单孢的进行了全基因组测序,并构建了不同发育时期的数字基因表达(DGE)标签库,基于这些结果我们在草菇中新鉴定了 5个新的漆酶(lac)基因。在草菇基因组274 kb的一段序列中有一个含11个漆酶基因的基因家族,这些漆酶基因根据内含子的特征可以分为两个子家族。这个漆酶基因家族在草菇的基质降解和子实体发育中起一些重要作用。6个有信号肽和5个无信号肽的漆酶基因在分别在胞内胞外起作用,lac3和lac4可能参与基质降解;lac5是唯一在原基的时候高表达的基因,它可能参与子实体的形成。除了对草菇漆酶基因家族的一些生物信息学分析,我们从草菇中分离到两个典型的漆酶基因lac3和lac4以及它们的ORF。lac3和lac4的cDNA克隆分析得出lac3含有14个内含子和1548 bp的ORF、lac4含有18个内含子和1689 bp的ORF。lac3和lac4分别含有19和23个氨基酸(AA)的信号肽,编码着496和539个AA的成熟蛋白。切除掉信号序列的lac3和lac4利用含有a-信号肽的pPIC9K载体转入到毕赤酵母GS115中进行表达,结果发现只有lac3能表达出活性漆酶产物。发酵产物分析得出从毕赤酵母GS115分泌出的漆酶可以达到296.83 U/L,lac3预测的蛋白质分子量58 kDa与SDS-PAGE的结果一致,以ABTS为底物的最适pH和温度是4.5和45℃。lac3对温度很敏感,在pH 6.5的条件下较稳定。实验还测试了 4种可能的抑制剂和9种金属离子对lac3的影响,lac3活性会被40%乙醇和5mM Hg2+完全抑制,一些金属离子会提升lac3的活性,一些则对lac3没什么影响。我们的实验结果对于草菇漆酶的异源表达提供了一个良好的基础。