【摘 要】
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目的:PLOD2在多种实体肿瘤进展中发挥促癌作用,但在胶质瘤中的生物学行为及分子机制尚未阐释清楚。本课题拟明确胶质瘤中PLOD2的表达及其对预后的影响,体外细胞实验研究PLOD2生物学功能;并探讨EGFR调控PLOD2表达的相关分子机制。方法:（1）通过IHC检测Ⅱ-Ⅳ级胶质瘤临床标本PLOD2蛋白表达,CGGA数据分析Ⅱ-Ⅳ级胶质瘤PLOD2 m RNA表达水平,Kaplan-Meier分析PL
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目的:PLOD2在多种实体肿瘤进展中发挥促癌作用,但在胶质瘤中的生物学行为及分子机制尚未阐释清楚。本课题拟明确胶质瘤中PLOD2的表达及其对预后的影响,体外细胞实验研究PLOD2生物学功能;并探讨EGFR调控PLOD2表达的相关分子机制。方法:（1）通过IHC检测Ⅱ-Ⅳ级胶质瘤临床标本PLOD2蛋白表达,CGGA数据分析Ⅱ-Ⅳ级胶质瘤PLOD2 m RNA表达水平,Kaplan-Meier分析PLOD2表达对胶质瘤患者临床预后的影响。CGGA数据分析胶质瘤中EGFR和PLOD2 m RNA水平的相关性;WB和q RT-PCR分析胶质瘤细胞U87、LN229以及过表达EGFR的细胞U87 vⅢ、LN229 vⅢ中EGFR对PLOD2蛋白和m RNA表达的影响。用促进EGFR表达的生长因子受体EGF以及抑制其表达的抑制剂Erlotinib处理胶质瘤细胞后WB分析PLOD2蛋白表达变化。（2）采用基因敲除技术,慢病毒sh-PLOD2转染过表达EGFR vⅢ的胶质瘤细胞系,通过体外细胞增殖、克隆形成和细胞划痕、细胞侵袭实验分析PLOD2在胶质瘤中的生物学功能。（3）CGGA数据库分析胶质瘤中STAT3和PLOD2 m RNA表达的相关性。WB和q RT-PCR分析慢病毒sh-STAT3对胶质瘤U87 vⅢ和LN229 vⅢ细胞中PLOD2蛋白和m RNA表达影响。双荧光素酶报告基因分析转录因子STAT3对PLOD2转录水平的影响。WB分析在过表达EGFR的胶质瘤细胞中抑制剂Erlotinib和Cryptotanshinone阻断STAT3磷酸化后PLOD2的蛋白表达。IHC和Kaplan-Meier方法分析p EGFR或p-STAT3、PLOD2共表达对胶质瘤患者临床预后的影响。结果:（1）在胶质瘤病理组织标本中PLOD2的蛋白表达以及CGGA数据库中PLOD2的m RNA表达随着胶质瘤级别的增高而增加,且与临床患者预后不良有关（P<0.05）;在CGGA数据库中EGFR和PLOD2的m RNA表达水平呈正相关性（P<0.05）;EGFR突变的胶质瘤细胞系U87 vⅢ和LN229 vⅢ中PLOD2的蛋白表达明显升高,抑制剂Erlotinib能有效抑制生长因子EGF激活EGFR磷酸化以及PLOD2的蛋白表达。（2）CCK8实验、平板克隆实验、细胞划痕实验和侵袭实验提示:与对照组相比,敲减PLOD2表达的胶质瘤细胞其增殖和侵袭能力均明显减弱（P<0.05）。（3）在CGGA数据库中STAT3和PLOD2的m RNA表达水平呈正相关性（P<0.05）;与对照组相比,敲减STAT3的胶质瘤细胞系中PLOD2的蛋白和m RNA表达明显降低;双荧光素酶报告基因提示转录因子STAT3能明显上调PLOD2的转录水平（P<0.05）;抑制剂Erlotinib和Cryptotanshinone能有效抑制生长因子EGF激活STAT3磷酸化以及PLOD2的蛋白表达;p-EGFR或PLOD2和p-STAT3的共表达提示胶质瘤患者预后较差（P<0.05）。结论:PLOD2在胶质瘤中表达异常升高且与临床预后不良有关;在胶质瘤中EGFR上调PLOD2的表达,其调控机制可能是EGFR通过激活转录因子STAT3,促使p-STAT3入核后与PLOD2启动子区结合,增强PLOD2的转录水平促进其表达,进而驱动胶质瘤的发生发展。
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