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苦荞是一种重要的药食两用植物,在我国民间早己被用来治疗和缓解多种疾病,包括糖尿病、高血压、高血糖及血脂异常等。研究表明,苦荞的功能活性与其含有丰富的生物类黄酮有密不可分的联系,然而,苦荞黄酮在肝保护和血管保护方面的调节机制目前还不清楚。因此,本研究选取苦荞麦为原材料,通过甲醇提取得到苦荞黄酮粗提物,经过大孔吸附树脂纯化后,得到苦荞黄酮纯化产物(TBF),利用HPLC分析法对苦荞黄酮提取物进行测定分析,并将得到的TBF作为饮食营养干预剂,通过动物实验和细胞实验建立两种不同的损伤模型,探究TBF在不同模型中对肝细胞和血管内皮的调节效应。主要包括以下内容:(1)用75%甲醇溶液浸提苦荞黄酮,每次2 h,重复三次后,将提取液在3,000g条件下离心10 min,然后经旋转蒸发,真空冷冻干燥,得苦荞黄酮粗提物。用AB-8大孔树脂对苦荞黄酮粗提物进行纯化,得到苦荞黄酮纯化产物(TBF)。HPLC法分析结果表明,苦荞黄酮纯化物的主要成分为芦丁和槲皮素,且芦丁和槲皮素两种成分的含量分别达到了536.2 mg/g和371.6mg/g,占TBF的90.8%。此结果表明AB-8大孔吸附树脂对苦荞黄酮有较好的纯化效果。(2)TBF对高剂量TMAO引起的小鼠血管内皮损伤及肝损伤的调节效应的研究结果显示:在连续喂食8周1.5%的TMAO后,小鼠的体重、肝重及肝指数明显增加;血脂中的TC、TG和LDL含量均呈增加趋势,而HDL含量明显降低;血清中NO、eNOS和PGI2的含量也明显降低,而ET-1及TX-A2的含量显著增加。然而,在给小鼠喂食400和800ng/kg.bw剂量的TBF后,小鼠体重、肝重、肝指数、TC、TG、LDL、ET-1和TX-A2的含量均显著的降低,且HDL、NO、eNOS及PGI2的含量均明显的增加,表明TBF可以有效地改善了高TMAO饮食诱导的小鼠体重增加、血脂异常及血管内皮损伤;血管H&E染色进一步验证了上述生化指标,且随着TBF浓度的增大,血管壁厚度减小、血管内膜弹性逐渐恢复、介质排列更规整,当TBF浓度达到最大时,干预效果最好。此外,高剂量TMAO能够升高小鼠肝脏AST和ALT活性,及NEFA和MDA的含量,同时降低SOD和GSH-Px的活性。然而,TBF可以通过降低小鼠肝匀浆中AST、ALT、NEFA及MDA的含量,升高SOD及GSH-Px活性,有效地抑制TMAO诱导的小鼠肝毒性及氧化损伤。与此同时,肝脏H&E染色和油红O染色的结果进一步验证了上述生化指标结果,且随着TBF浓度的增大,小鼠肝组织中细胞坏死及浸润现象逐渐减轻、空泡逐渐减少、脂肪滴逐渐减少,当TBF达到最大剂量时,调节效果最好。(3)TBF对高葡萄糖诱导的HepG2细胞氧化应激及胰岛抵抗的调节效应的研究结果显示:TBF可以降低高葡萄糖诱导的HepG2细胞中ROS及羰基化合物含量升高,并增加胰岛抵抗HepG2细胞中GSH的含量;此外,TBF通过调节GPx和GR的酶活性,以及调节Nrf2和MAPKs信号通路,有效的改善了高葡萄糖介导的HepG2细胞氧化损伤。值得注意的是,本实验结果发现MAPKs通路参与了TBF对高葡萄糖诱导的氧化应激及胰岛抵抗的调节效应。研究结果显示,ERK及p38抑制剂可以增强TBF对总Nrf2及核Nrf2水平的调节;部分MAPKs阻断剂加强了TBF对ROS和GSH含量,及GPx和GR活性的调节;JNK阻断剂增强了TBF对高葡萄糖诱导的p-(Ser307)-IRS-1水平增加及总IRS-1水平降低的抑制作用;三种MAPKs抑制剂均能提高TBF对糖吸收的调节作用。结果表明阻断MAPKs激酶可以部分增强TBF对高葡萄糖诱导的肝细胞损伤的调节效应。本研究首次提供了较充分的证据表明苦荞黄酮具有保护肝细胞免受高葡萄糖诱导的氧化应激及胰岛抵抗的作用。此外,研究发现MAPKs分子通路参与介导苦荞黄酮对HepG2细胞Nrf2水平和胰岛素抵抗的调节效应。