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基质金属蛋白酶家族(MMPs)是一类钙离子与锌离子依赖的肽链内切酶。MMPs在体内的生物学功能主要是降解细胞外基质,同时也参与细胞生长、存活、分化,血管生成,肿瘤细胞浸润,免疫与炎症反应的过程。MMPs根据其结构和功能的不同可以分为膜型MMPs和分泌型MMPs。目前关于MMPs转录调控及活性调节已有了广泛的研究,但对于MMPs在细胞内的转运及相关分子机制尚不明确。MMP-26(基质溶解素2)于2000年被发现,是一个新的分泌型的MMPs家族成员。MMP26在体内可以水解细胞外基质和部分非细胞外基质蛋白。MMP-26的m RNA在正常组织中较少被发现,而却被大量发现于多个上皮癌细胞及与他们相对应的细胞系中。因此目前研究认为MMP-26在肿瘤的发生与发展过程中发挥着重要的角色。同时,MMP-26也是目前发现的MMPs家族中最小的成员之一,具有261个氨基酸,一级结构包含信号肽区、前肽区和催化结构域三个部分。通常分泌蛋白都包含信号肽,而分泌蛋白的信号肽不仅可以影响蛋白分泌到细胞外的量,有时甚至可以被视为膜定位的信号。虽然MMP-26含有信号肽结构,然而在已有的报道中却表明,MMP-26在多种细胞及样品中主要在细胞内被检测到,而在细胞外并没有发现。因此我们推测MMP-26的序列当中除信号肽以外,仍包含另一个可以使MMP-26滞留于细胞内的定位信号。本论文采用分子生物学和细胞生物学的方法,运用了SOE PCR,点突变PCR等技术构建了多个MMP-26的删除型突变体,并与绿色荧光蛋白e GFP相融合,运用PEI技术将突变体转入Hela细胞当中,并使用荧光显微镜对突变体的定位进行观测。首先我们通过构建MMP-26Δ80-125-e GFP,MMP-261-193Δ80-125-e GFP和MMP-26Δ80-193-e GFP三个突变体的构建及细胞实验确定了在保留信号肽的情况下,MMP-26的80-125位氨基酸包含其定位于内质网的唯一关键序列。而后通过MMP26S80-125-e GFP,MMP26S87-125-e GFP,MMP26S88-125-e GFP,MMP26S89-125-e GFP四个突变体的构建及细胞实验我们发现,MMP-26的N末端删除到第88位氨基酸时可以定位于内质网当中,而当删除到第89位氨基酸时MMP-26则不能定位于内质网;通过MMP26S88-124-e GFP,MMP26S88-123-e GFP,MMP-26S88-122-e GFP,MMP26S88-121-e GFP突变体的构建及细胞实验,我们发现当MMP-26的C末端被删除至123位氨基酸时可以定位于内质网,而被删除至122位氨基酸时则不能定位于内置网。因此,我们确定,MMP-26定位于内质网的关键序列是第88-123位氨基酸。综上所述,本论文首次证实了MMP-26除信号肽外定位于内质网的关键序列是第88-123位氨基酸,证明了MMP-26定位于内质网采用的是一个非KDEL序列的机制。本论文的内容将有助于新的非经典内质网定位序列及其相关受体和分子机制的研究。此外,目前人们对MMP-26的结构及功能认识尚不全面,本论文的研究为进一步探索MMP-26定位于内质网的分子机制,及其关键序列在内质网上的受体提供了线索。这将有助于研究MMP-26在细胞内的正常生物学功能,也为探索MMP-26与癌症的关系奠定基础。