仿刺参消化道中产酶菌株的筛选鉴定及其在仿刺参饲料中的应用

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从仿刺参(A.J a p o n i c u s)消化道中筛选出3株菌株,通过形态特征、生理生化特征和1 6 S r D N A分子这三方面鉴定它们分别为:解淀粉芽孢杆菌X 3-3(B a c i l l u s a m y l o l i q u e f a c i e n s X 3-3)、甲基营养型芽孢杆菌X 4-1(B a c i l l u s m e t h y l o t r o p h i c u s X 4-1)和巨大芽孢杆菌X 4-5(B a c i l l u s m e g a t e r i u m X 4-5)。其中解淀粉酶芽孢杆菌X 3-3和甲基营养型芽孢杆菌X 4-1这两株细菌分泌消化酶活性较高,巨大芽孢杆菌X 4-5则净水效果较好。通过单因素控制实验得出解淀粉酶芽孢杆菌X 3-3和甲基营养型芽孢杆菌X 4-1的最佳生长和产酶条件:解淀粉芽孢杆菌X 3-3的最适生长温度3 4℃-3 7℃,最适初始p H为8.0,最适盐度为3 0。甲基营养型芽孢杆菌X 4-1的最适生长温度为3 7℃,最适初始p H为7.0-8.0,最适盐度为3 0。在水质净化分析方面,采用萘乙二胺分光光度法测定水质中亚硝酸盐含量,用靛酚蓝分光光度法测定氨氮含量,结果表明,巨大芽孢杆菌X 4-5在改善养殖水质方面具有潜在的应用价值。研判这三株菌作为益生菌的实验包括各种安全性检测:对仿刺参消化道细胞的粘附作用、测定微生物对斑马鱼(Z e b r a f i s h,D a n i o r e r i o)毒性的饲养实验、针对病原菌的拮抗实验。结果表明,在以模式动物斑马鱼为宿主的攻毒试验中,与对照组相比较,实验组成活率没有发生显著变化,且成活率都高于9 0%;这三株菌在仿刺参消化道细胞中的粘附率都高于8 5%,说明这三种细菌对仿刺参消化道细胞有较好的粘附能力,能够在宿主肠道内栖息定植;在菌株调节肠道微生态方面,这3株菌均能够与假单胞菌和副溶血弧菌等致病菌产生拮抗作用。以1%剂量添加于饲料中的实验结果表明,解淀粉芽孢杆菌X 3-3无论是单独使用还是与巨大芽孢杆菌X 4-5或/和甲基营养型芽孢杆菌X 4-1联合使用皆能显著(P<0.0 5)提升仿刺参的生长和消化酶活,3 0 d和6 0 d的检测结果差异不明显(P>0.0 5);三种菌制剂的联合使用在显著提升仿刺参体腔液A K P、A C P、S O D、L Z M和P O D等体液免疫相关因子活性水平效果优于两种菌的配伍使用(P<0.0 5),且除了解淀粉芽孢杆菌X 3-3,与单一菌制剂相比,两两配伍的复合菌制剂对机体相关指标影响较大,差异显著(P<0.0 5)。综合分析,效果最好的微生态制剂为三者联合使用的复合菌制剂,能显著提升仿刺参特定生长率、消化酶活性和免疫相关因子水平,具有开发应用价值。
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