六叶龙胆化学成分及质量标准研究

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目的:对民间草药六叶龙胆(Gentiana hexaphylla Maxim.ex Kusnez.)进行化学成分的分离试验研究,掌握其所含的主要化学成分;对其生药学特征的研究、主要药效成分龙胆苦苷的含量测定、建立六叶龙胆的质量标准,控制其药材质量标准。  方法:主要化学成分提取分离:对六叶龙胆全草(约1.2kg)切碎后,用20倍量的70%乙醇回流提取两次,每次2小时,旋转蒸发回收乙醇得到总浸膏,依次用石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯、正丁醇等体积进行萃取至近无色,得到石油醚部分、乙酸乙酯部分、正丁醇部分浸膏。其中正丁醇部分、乙酸乙酯部分浸膏,分别依次采用硅胶色谱柱层析、凝胶柱色谱层析、开放ODS柱色谱层析、制备液相分离方法进行单体化合物分离。  主要安全和有效性指标测定:依据2010年版《中国药典》一部附录项下相关标准,采用理化方法对六叶龙胆根、茎、叶等部位进行了横切面观察研究、薄层色谱法鉴别项研究,进行了水分测定法、灰分测定法、浸出物含量测定以及重金属限量检查方法进行相关安全性项目的分析研究,采用高相液相色谱法对其主要药效成分龙胆苦苷进行含量测定的品质分析研究。  结果:六叶龙胆药材的乙酸乙酯提取物中分离得到1个化合物,正丁醇提取物中共分离得到9个化合物,通过理化性质及光谱数据分析(UV、IR、1D-NMR、2D-NMR、MS)鉴定了它们的结构:化合物1是龙胆苦苷,化合物2是当药苷,化合物3是当药苦苷,化合物4是Poacynose,化合物5是5,7,3,4-四羟基-8-C-β-D-葡萄糖黄铜碳苷,化合物6是三叶草苷,化合物7是vanillyl alcohol-4-O-β-D-glucopyranoside,化合物8是异它乔糖甙,化合物9是1,5-bis(β-D-glucopyranosyloxy-2-(3,3-dimethylallyl)benzene,化合物10是6-hydroxy-2-(hydroxymethyl) phenylβ-D-glucopyranoside。其中化合物1、2、3、6是裂环烯醚萜苷,化合物5是黄酮苷。上述化合物均为首次从该种植物中分离得到。  对六叶龙胆生药学特征有了初步认识,确定了以龙胆苦苷作为对照品,以三氯甲烷:甲醇:水(30:10∶3)下层溶液为展开剂系统的薄层色谱法鉴别方法。六叶龙胆中龙胆苦苷含量不得低于0.8%。确立了检查项下水分不得过10.0%;总灰分不得过6.0%,酸不溶灰分不得过1.0%;水溶液热浸法浸出物不得低于25.0%。铅不得过百万分之一、镉不得过千万分之二、砷不得过千万分之十二、汞不得过千万分之三、铜不得过百万分之十一。  结论:通过上述试验研究,首次分离确定了六叶龙胆中的所含的主要化学成分,对阐述具体药理作用提供物质基础。首次建立了六叶龙胆的质量标准。对控制其药材质量提供了参考依据。
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